活細胞/凋亡細胞/壞死細胞鑒別試劑盒
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- 公司名稱 南京賽泓瑞生物科技有限公司
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- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2017/7/17 9:03:57
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活細胞/凋亡細胞/壞死細胞鑒別試劑盒
( Normal/Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit)
Cat number:KGA For Research Use Only
Store atRT for one year
Expire date:
一、試劑盒說明
細胞壞死和凋亡是兩種截然不同的細胞學現象,二者發生的過程在形態學上有很大的區別。在細胞壞死時,細胞膜發生滲漏,細胞內容物包括細胞器以及染色質釋放到胞外。而在細胞凋亡過程,起始階段,染色質固縮、分離并沿核膜分布,細胞質亦發生固縮,但細胞膜依然完整未失去選擇透性;在凋亡后期,核染色質斷裂為大小不等的片斷,與某些細胞器如線粒體一起聚集,為反折的細胞膜所包圍,以后逐漸分離,形成凋亡小體。
本產品提供的染料可以分別對正常細胞、凋亡細胞和壞死細胞的細胞核進行染色。其染色原理為:Dye Reagent 1只進入活細胞,正常的細胞核及處于凋亡早期的細胞核呈現綠色;Dye Reagent 2只能進入死細胞,將死細胞以及凋亡晚期的細胞核染成橙色。因此通過在熒光顯微鏡下觀察細胞顯色和形態的不同,可以同時將正常細胞、壞死細胞、凋亡早期細胞和凋亡晚期細胞區分開來。
二、試劑盒組份
組份 | Cat: KGA501 (50 assays) | Cat: KGA502 (100 assays) | 儲存條件 |
Dye Reagent 1 | 25μL | 50μL | 室溫避光 |
Dye Reagent 2 | 25μL | 50μL | 室溫避光 |
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
熒光顯微鏡(510nm激發波長)、載玻片、蓋玻片、1.5m L Microtube、微量移液器
四、注意事項
1. Dye Reagent 1、2及Mixed Dyes Reagent有毒,操作時請戴手套;
2. 根據需要檢測的實際樣品數在使用前將兩種染料混合,剩余混合染液注意避光保存留待下次使用;
3. 利用血球計數板進行該項操作時,不要用血計板配套的那種質地較硬的蓋玻片,而用普通的蓋玻片反而更利于結果的觀察。
五、操作方法
1. 用適當的方法誘導細胞凋亡;
2. 用PBS洗滌細胞二次,并配成濃度為5×105~6×106cells/ml細胞懸液;
3. 將Dye Reagent 1和Dye Reagent 2等體積混合形成Mixed Dyes Reagent(見注意事項2);
4. 吸取25μL的細胞懸液同1μL的Mixed Dyes Reagent輕輕混勻;
5. 吸取上述10μL的混合液置于一潔凈的載玻片,并用蓋玻片蓋上細胞(見注意事項3);
6. 熒光顯微鏡510nm激發波長觀察,分別對下列四類細胞進行計數,注意細胞總量須超過200個。
正常細胞:細胞呈圓形,核質體被均勻染成綠色,大小形狀較單一;
壞死細胞:細胞呈橢園形,核質體被均勻染成橙黃色,大小形狀較單一;
凋亡早期細胞:核質體呈綠色,細胞形狀不規則,如呈新月形,;
凋亡晚期細胞:核質體呈橙色,染色質濃縮,細胞核碎裂成點狀,大小不一,可見胞質芽狀突