Nav1.7-GFP HEK293細胞系
- 公司名稱 武漢艾美捷科技有限公司
- 品牌 BPS Bioscience
- 型號
- 產地
- 廠商性質 代理商
- 更新時間 2024/12/26 13:34:08
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供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
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穩定重組HEK293細胞系,工程化設計用于多X環素誘導表達人類Nav1.7(Genbank #Q15858),在C末端融合綠色熒光蛋白[激發約395 nm,475 nm;發射約510 nm],并帶有C末端鏈球菌素結合肽(SBP)融合。Nav1.7是一種河T毒素敏感的電壓門控鈉通道IX亞型α亞基(SCN9A)。
Nav1.7是一種電壓門控鈉離子通道,由人類SCN9A基因編碼。它通常在兩種類型的神經元中高水平表達:背根神經節和三叉神經節的傷害感受神經元,以及交感神經節神經元,這些是自主(不自主)神經系統的一部分。
Nav1.7存在于痛覺感覺神經末梢,即傷害感受器附近,接近沖動發起區域。Nav1.7通道產生快速激活和失活的電流,對河T毒素水平敏感。缺乏傷害感受器中Nav1.7的敲除小鼠顯示出對炎癥性疼痛反應減少[1]。
作為BPS Bioscience在中國的區域總代理,艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產品Nav1.7-GFP HEK293 細胞系。產品僅用于科研,不可用于臨床診斷。
產品名稱 | 貨號 | 詳情 |
Nav1.7-GFP HEK293 細胞系 | BPS-60507 | 查看 |
應用
? 藥物化合物篩選
? 功能測定
細胞培養協議
細胞解凍
1. 在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細胞的小瓶大約60秒。細胞解凍后(可能比60秒稍快或稍慢),迅速將小瓶的全部內容轉移到含有10 ml預熱的解凍培養基4(無Blasticidin或Zeocin)的試管中。在37°C水浴中放置細胞過久將導致活性迅速喪失。
2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘,去除培養基并將細胞在5 ml預熱的解凍培養基4(無Blasticidin或Zeocin)中重懸。
3. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養瓶中,并在37°C、5% CO2培養箱中培養。
4. 培養24小時后,檢查細胞附著和活性。更換培養基為新鮮的解凍培養基4(無Blasticidin或Zeocin),并繼續在37°C、5% CO2培養箱中培養,直到細胞準備好傳代。
5. 細胞應在w全融合前傳代。在s次傳代及后續傳代中,使用生長培養基4A(含Blasticidin和Zeocin)。
細胞傳代
1. 抽去培養基,用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗細胞,并用0.05% Y酶/EDTA從培養容器中分離細胞。
2. 一旦細胞分離,加入生長培養基4A并轉移到試管中。以300 x g的速度離心細胞5分鐘,去除培養基并將細胞在不含Blasticidin和Zeocin的生長培養基4A中重懸。按照每周1:10至1:15的期望亞培養比例,將細胞種入新的培養容器中。
細胞冷凍
1. 抽去培養基,用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗細胞,并用0.05% Y酶/EDTA從培養容器中分離細胞。
2. 一旦細胞分離,加入生長培養基4A并計數細胞。
3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘,去除培養基并將細胞在4°C冷凍培養基(BPS Bioscience #79796,或10% DMSO + 90% FBS)中重懸,細胞濃度約為2 x 10^6個細胞/ml。
4. 將1 ml的細胞懸浮液分裝到冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻,并在-80°C下保存過夜。
5. 次日將小瓶轉移到液氮中保存。
注意:建議在早期傳代時擴增細胞并至少冷凍10個小瓶以備將來使用。
目標蛋白表達的誘導
為了表達Nav1.7,細胞在收獲或測定前24小時用DMEM/F12 50/50補充10% FBS、1%青M素/鏈M素、1 ?g/ml多X環素(Biochemika #44577)和3 mM丁酸鈉(Acros Organics #263190250)誘導。
圖1. 表達Nav1.7的細胞的Western Blot。
使用抗鈉通道Nav1.7,克隆N68/6(Millipore #MABN41)染色的HEK293 Nav1.7細胞的Western Blot,隨后使用堿性磷酸酶偶聯的抗小鼠IgG(Rockland Immunochemicals #610-1502)。M:分子量標記。
文獻參考:
1. Catterall, W.A. Cell and Developmental Biology 16: 521–555 (2000).
2. Choi, J.S., et al. Neurology 67:1563-1567 (2006).
3. Li, Y., el al. Protein Science 20 (1): 140–149 (2011).
BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商,公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立,從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案,以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、CRISPR、細胞信號轉導等,主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。
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