產(chǎn)品名稱：WinSera®優(yōu)級(jí)免分裝胎牛血清

貨號(hào)：FBS50-WS-002

規(guī)格：50ml*10

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、50ml規(guī)格，無需分裝，降低污染可能性。

2、三次0.1μm無菌過濾。

3、高品質(zhì)低內(nèi)毒素，適合多種細(xì)胞培養(yǎng)

4、高性價(jià)比，批次差異小，質(zhì)量穩(wěn)定。

WinSera胎牛血清，50ml規(guī)格便捷裝，遠(yuǎn)離分鐘污染風(fēng)險(xiǎn)，即取即用。

§細(xì)胞抱團(tuán)怎么處理?

一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)是正常現(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細(xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán)，可以通過細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團(tuán)，也可以嘗試一下方法：將細(xì)胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團(tuán))。

§細(xì)胞內(nèi)有空泡，是否是正常現(xiàn)象?

部分細(xì)胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等)，這個(gè)是正常現(xiàn)象。如果只有少數(shù)細(xì)胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳，可以通過調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時(shí)間等方法來調(diào)整細(xì)胞狀態(tài);如果大部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡，且單個(gè)細(xì)胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細(xì)胞代次較高，細(xì)胞老化所致，需更換代次較早的細(xì)胞。

§細(xì)胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因

很可能是培養(yǎng)體系不適合細(xì)胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系);或者消化過度，對(duì)細(xì)胞有嚴(yán)重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細(xì)胞，傳代太稀;或者生長(zhǎng)較快的細(xì)胞，傳代較密，細(xì)胞嚴(yán)重堆疊生長(zhǎng))。

§細(xì)胞生長(zhǎng)逐漸變慢是什么原因?

細(xì)胞增殖變慢有以下原因：1. 消化過度 2. 傳代過密 3.細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良 4.細(xì)胞頻繁傳代 5.細(xì)胞狀態(tài)不佳或老化 6.細(xì)胞存在污染。

§培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%或10%CO2?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10% CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時(shí)，則應(yīng)使用5% CO2培養(yǎng)細(xì)胞。

§CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?

定期(每周一次)更換水盤里面的水，水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子，水盤中可添加1%硫酸銅以預(yù)防霉菌污染。

§細(xì)胞接種密度多少合適?

依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長(zhǎng)的一個(gè)重要原因。按照我們的經(jīng)驗(yàn)：一般倍增時(shí)間24 h內(nèi)的細(xì)胞，傳代比率1:6-1:12為宜，倍增時(shí)間24-48 h的細(xì)胞，傳代比率1:3-1:8為宜，倍增時(shí)間超過48h的細(xì)胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。因此選擇正確的，靠譜的胎牛血清及廠家極其重要↓↓↓↓

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血清使用需要注意的問題

（一）被誤判為污染的“小黑點(diǎn)”

經(jīng)過熱處理的血清，往往沉淀物會(huì)增多，而這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像是污染物，常常會(huì)讓研究者誤以為血清遭到污染。然而，把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物進(jìn)一步增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

我們的經(jīng)驗(yàn)是拿到鏡下去觀察是否為細(xì)菌狀或真菌狀形態(tài)。還有就是做無菌培養(yǎng)，取一點(diǎn)血清在培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)箱里培養(yǎng)幾天，觀察沉淀物是否有變化。一般情況下，這些沉淀物并不會(huì)影響血清的正常使用，Lab里往往用0.22μM的濾膜過濾一下就繼續(xù)使用了。

（二）解凍血清

解凍血清時(shí)，請(qǐng)遵循推薦的分步解凍方法（-20℃→4℃→室溫）。實(shí)驗(yàn)表明，如果血清解凍溫度過高（如-20℃→37℃），很容易產(chǎn)生沉淀。解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)搖勻，使溫度和成分均勻，減少沉淀的發(fā)生。請(qǐng)不要長(zhǎng)時(shí)間將血清放置在37℃環(huán)境中，如果放置時(shí)間過長(zhǎng)，血清會(huì)變得混濁，血清中的許多不穩(wěn)定成分會(huì)受到破壞，從而影響血清的質(zhì)量。血清的熱滅活很容易引起沉淀物的增加，我們認(rèn)為這一步是不必要的。如需對(duì)血清進(jìn)行熱滅活，請(qǐng)遵循56℃、30min原則，隨時(shí)搖勻。如果溫度過高、時(shí)間過長(zhǎng)或搖晃不均勻，沉淀物就會(huì)增加。

血清中出現(xiàn)沉淀物的原因有很多，但最常見的是血清中脂蛋白的變性，解凍后血清中還會(huì)存在纖維蛋白（形成凝塊的蛋白質(zhì)之一），這也是產(chǎn)生沉淀物的主要原因之一。然而，這些絮狀沉淀物雖然并不影響血清本身的質(zhì)量，但有可能會(huì)被誤判為污染物。如果要去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝在無菌離心管中，以1200rpm的速度離心，然后將上清液加入培養(yǎng)基中進(jìn)行過濾。

（三）保存血清

避免血清出現(xiàn)非污染性沉淀物的最好方法就是減少血清反復(fù)凍融的次數(shù)，所以血清少量分裝凍存是一個(gè)好方法。建議血清保存在-20～-5℃之間。如果以4℃保存，不要超過一個(gè)月。如果一次不能用完一瓶，建議將血清分裝到無菌離心管中，然后再凍存。

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