60724ES (FC)含量檢測(cè)試劑盒 微量法
參考價(jià) | ¥785.00 |
- 公司名稱(chēng) 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號(hào)60724ES
- 所在地上海市
- 廠(chǎng)商性質(zhì)生產(chǎn)廠(chǎng)家
- 更新時(shí)間2024/2/18 16:38:05
- 訪(fǎng)問(wèn)次數(shù) 221
100 | 785.00元 | 99 件可售 |
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供貨周期 | 兩周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
游離膽//固//醇(FC)是構(gòu)成細(xì)胞膜的主要成分,也是合成性激素、膽汁酸、維生素D和腎上腺皮質(zhì)激素等物質(zhì)的重要原料,F(xiàn)C濃度可作為脂代謝的指標(biāo)。本試劑盒的檢測(cè)方法是微量法,既可以用可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè),也可以用酶標(biāo)儀檢測(cè)。該產(chǎn)品的檢出限是0.119 μmol/mL,線(xiàn)性范圍為0.125-6 μmol/mL。
作用原理是FC氧化酶可催化FC生成4-膽甾烯酮和H2O2,過(guò)氧化物酶催化H2O2、4-氨基安//替//比//林和酚生成紅色醌類(lèi)化合物,其在500 nm有吸收峰,顏色深淺與FC含量成正比。作用方式如下:
測(cè)定總膽//固//醇(TC)請(qǐng)選擇60723ES 總膽//固//醇(TC)含量檢測(cè)試劑盒;測(cè)定游離膽//固//醇(FC)請(qǐng)選擇60724ES 游離膽//固//醇(FC)含量檢測(cè)試劑盒。
產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 60724ES60 |
規(guī)格 | 100 T |
組分信息
組分編號(hào) | 組分名稱(chēng) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存條件 |
60724-A | 工作液 | 20 mL | 2~8℃ |
60724-B | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 10 mg | 2~8℃ |
儲(chǔ)存條件
2~8℃保存,有效期6個(gè)月。
使用說(shuō)明
【注意事項(xiàng)】實(shí)驗(yàn)之前建議選擇3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi),建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和溶劑:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、可調(diào)式移液槍、EP管、蒸餾水和異丙醇。
溶液的配制:
1)自備提取液異丙醇:大約需要110 mL,常溫保存;試劑盒內(nèi)提供一個(gè)30 mL棕色空瓶,僅做分裝使用。
2)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配置:10 mg膽//固//醇使用前加入517 μL提取液,振蕩溶解后即為50 μmol/mL的膽//固//醇標(biāo)準(zhǔn)溶液,2~8℃可保存4周。
3)標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋?zhuān)喝?/span>50 μmol/mL膽//固//醇標(biāo)準(zhǔn)液20 μL ,加入480 μL異丙醇,充分混勻,配制成2 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。注意2 μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液最好現(xiàn)配現(xiàn)用,實(shí)驗(yàn)中每管需10 μL,但為減小實(shí)驗(yàn)誤差,故配制體積偏大。
3. 操作步驟
1)樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
a. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約0.1 g組織,加入1 mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿。8000 g,4℃離心10 min,取上清置冰上待測(cè)。
b. 細(xì)菌/細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1 mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300 w,超聲2秒,間隔3秒,總時(shí)間3 min);然后 8000 g,4℃離心10 min, 取上清置于冰上待測(cè)。
c. 血清(漿)等液體樣本:直接測(cè)定,若有沉淀請(qǐng)離心后取上清待測(cè)。
2)測(cè)定步驟
a. 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至500 nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。
b. 按需取出一定量的工作液,37℃水浴預(yù)熱30 min。
c. 在1.5 mL EP管/96孔板按下表步驟加樣
試劑名稱(chēng)(µL) | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
異丙醇 | 10 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)液 | - | 10 | - |
待測(cè)上清 | - | - | 10 |
工作液 | 190 | 190 | 190 |
充分混勻,室溫靜置15 min,反應(yīng)完成后測(cè)定500 nm處吸光值A(chǔ),分別記為A測(cè)定、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白,ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)1-2個(gè)。注:若樣本為血清,則空白管中的提取液(異丙醇)需要更換為蒸餾水進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 |
總膽//固//醇含量計(jì)算
a. 血清(漿)中 FC 含量計(jì)算:
FC含量(μmol/dL)=C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×100=200×(A測(cè)定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)
b. 組織或細(xì)胞、細(xì)菌中 FC 含量計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:FC含量(μmol/mg prot)=C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×V樣總÷(Cpr×V樣總)=2×(A測(cè)定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算:FC 含量(μmol/g 質(zhì)量)=C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×V樣總÷W=2×(A測(cè)定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W
(3)按細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計(jì)算:FC 含量(μmol/104 cell)=C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×V樣總÷N=(A測(cè)定-A 空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)
C 標(biāo)準(zhǔn)液:標(biāo)準(zhǔn)液的濃度,2 μmol/mL;V 樣總:加入提取液的體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;100:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1 dL=100 mL;500:細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量,500萬(wàn);N:細(xì)胞數(shù)量,以萬(wàn)計(jì)。
4. 實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
取 0.1 g 大鼠肝臟加入 1 mL 提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后按照測(cè)定步驟操作,使用 96孔板測(cè)得A空白=0.046、A標(biāo)準(zhǔn)=0.354、A測(cè)定=0.127,按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得:
FC含量(μmol/g 質(zhì)量)=2×(A測(cè)定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W =5.320 μmol/g 質(zhì)量。
注意事項(xiàng)
如果樣本吸光值大于1.2,建議將樣本用提取液稀釋后進(jìn)行測(cè)定。
提取液中含有使蛋白變形的成分,故按蛋白濃度計(jì)算時(shí)需要重新提取蛋白進(jìn)行測(cè)定。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
本產(chǎn)品僅作科研用途!