多功能蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析儀--PSA-16

技術(shù)原理：

蛋白質(zhì)是生物體中廣泛存在的一類生物大分子，具有特定立體結(jié)構(gòu)的和生物活性以及諸多功能，根據(jù)這些功能我們可以將其應(yīng)用于蛋白質(zhì)的分子設(shè)計(jì)、蛋白質(zhì)功能的改造、疾病的基因治療以及新型耐抗藥性藥物的開(kāi)發(fā)與設(shè)計(jì)甚至是發(fā)現(xiàn)生物進(jìn)化的規(guī)律等良好科研領(lǐng)域上。因此，蛋白質(zhì)具有非常重要的研究?jī)r(jià)值。

進(jìn)行蛋白質(zhì)性質(zhì)和功能研究的前提是獲得穩(wěn)定的蛋白質(zhì)樣品，而由于蛋白質(zhì)自身性質(zhì)的復(fù)雜性，難以保證獲得的蛋白質(zhì)樣品是否具有正確的三維結(jié)構(gòu)以及功能，因此急需一種技術(shù)手段或設(shè)備，對(duì)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性進(jìn)行分析，確定獲得蛋白質(zhì)適宜的緩沖液條件、蛋白質(zhì)的長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性等。另外在進(jìn)行蛋白質(zhì)-配體小分子相互作用研究時(shí)，因?yàn)樾枰Y選的小分子配體數(shù)量巨大，因此也急需一種技術(shù)手段或設(shè)備，可以高通量的對(duì)配體結(jié)合進(jìn)行篩選。

蛋白中的色氨酸和酪氨酸可以被280 nm的紫外光激發(fā)并釋放出熒光，其熒光性質(zhì)與所處的微環(huán)境密切相關(guān)。蛋白變性過(guò)程中，色氨酸從疏水的蛋白內(nèi)部逐漸暴露到溶劑中，熒光釋放的峰值也從330 nm逐漸轉(zhuǎn)移到350 nm。

差示掃描熒光法(differential scanning fluorimetry, DSF)是一種方便快捷的高通量藥物篩選及靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)的方法，通過(guò)熒光染料或蛋白內(nèi)源熒光信號(hào)監(jiān)測(cè)升溫過(guò)程中蛋白構(gòu)象的變化計(jì)算其熔解溫度Tm（折疊蛋白與去折疊蛋白相等時(shí)的溫度）。該方法具有蛋白樣品損耗少、通量高、溫度變化范圍廣及數(shù)據(jù)準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于蛋白質(zhì)穩(wěn)定性（蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性參數(shù)及其影響因素）、蛋白結(jié)構(gòu)和構(gòu)象、蛋白-配體相互作用及蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑、抑制劑、輔助因子等領(lǐng)域的研究。

染料法DSF是常用的是SYPRO Orange染料，SYPRO Orange 是一種環(huán)境敏感的疏水染料，當(dāng)溫度升高時(shí)，蛋白去折疊，疏水部分暴露出來(lái)，染料與蛋白質(zhì)的疏水部分特異性結(jié)合，熒光增強(qiáng)。在有特定化合物或配體結(jié)合的情況下，蛋白穩(wěn)定性會(huì)上升，表現(xiàn)為熔解溫度的上升。

內(nèi)源DSF（intrinsic DSF）則是基于蛋白去折疊過(guò)程中色氨酸發(fā)射光譜的位移進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)檢測(cè)溫度變化/變性劑濃度變化過(guò)程中蛋白內(nèi)源紫外熒光（350 nm/330 nm比值）的改變，獲得蛋白的熱穩(wěn)定性(Tm值)、化學(xué)穩(wěn)定性（Cm值）等參數(shù)。相比傳統(tǒng)的方法，無(wú)需添加染料，通量高，樣品用量少，數(shù)據(jù)精度高。

多功能蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析儀--PSA-16蛋白中的色氨酸和酪氨酸可以被280 nm的紫外光激發(fā)并釋放出熒光，其熒光性質(zhì)與所處的微環(huán)境密切相關(guān)。蛋白變性過(guò)程中，色氨酸從疏水的蛋白內(nèi)部逐漸暴露到溶劑中，熒光釋放的峰值也從330 nm逐漸轉(zhuǎn)移到350 nm。

內(nèi)源差示掃描熒光技術(shù)（intrinsic fluorescence DSF），通過(guò)檢測(cè)溫度變化/變性劑濃度變化過(guò)程中蛋白內(nèi)源紫外熒光（350 nm/330 nm比值）的改變，獲得蛋白的熱穩(wěn)定性(Tm值)、化學(xué)穩(wěn)定性（Cm值）等參數(shù)。相比傳統(tǒng)的方法，無(wú)需添加染料，通量高，樣品用量少，數(shù)據(jù)精度高。

產(chǎn)品介紹：

蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析儀PSA-16是一款無(wú)需加入熒光染料、高通量、低樣品消耗量檢測(cè)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的設(shè)備。該設(shè)備基于內(nèi)源差示掃描熒光技術(shù)（intrinsic fluorescence DSF），通過(guò)檢測(cè)溫度變化/變形劑濃度變化過(guò)程中蛋白內(nèi)源紫外熒光的改變，獲得蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性(Tm值)、化學(xué)穩(wěn)定性（Cm值）等參數(shù)。可應(yīng)用于蛋白緩沖液條件篩選及優(yōu)化、小分子與蛋白結(jié)合情況的定性測(cè)定、蛋白質(zhì)修飾及改造后的穩(wěn)定性測(cè)定、蛋白變/復(fù)性研究、不同批次間蛋白穩(wěn)定性對(duì)比等多個(gè)方面。

基于內(nèi)源差示掃描熒光技術(shù)（intrinsic fluorescence DSF），在無(wú)需添加外源染料的條件下，對(duì)蛋白進(jìn)行升溫變性，通過(guò)內(nèi)源熒光和散射光的變化與三級(jí)結(jié)構(gòu)變化的關(guān)系，PSA-16可用于測(cè)定不同buffer中蛋白的Tm值變化，獲得蛋白質(zhì)正確折疊的ZUI YOUbuffer條件；測(cè)定不同detergent條件下膜蛋白Tm值，進(jìn)行detergent篩選；測(cè)定不同添加劑對(duì)蛋白穩(wěn)定性的影響；測(cè)定添加配體后Tm值變化進(jìn)行配體結(jié)合篩選；測(cè)定蛋白中變性部分的比例，進(jìn)行質(zhì)量控制；測(cè)定蛋白Tm值與濃度的相關(guān)性，獲得 ZUI YOU的蛋白濃度進(jìn)行后續(xù)結(jié)晶等實(shí)驗(yàn)；測(cè)定蛋白去折疊過(guò)程，進(jìn)行蛋白復(fù)性條件篩選；測(cè)定蛋白folding enthalpy，研究蛋白的長(zhǎng)期穩(wěn)定性；測(cè)定不同批次和存儲(chǔ)后的蛋白的穩(wěn)定性，并進(jìn)行相似性評(píng)分，對(duì)蛋白進(jìn)行質(zhì)量控制。

多功能蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析儀PSA-16，無(wú)需對(duì)蛋白進(jìn)行熒光標(biāo)記，可以直接測(cè)定蛋白在不同緩沖液條件中的Tm值，進(jìn)行緩沖液篩選和優(yōu)化；同時(shí)還可以測(cè)定添加不同配體化合物對(duì)蛋白穩(wěn)定性的影響，通過(guò)Tm值變化進(jìn)行配體結(jié)合篩選。PSA-16滿足我們目前對(duì)于蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析的迫切需求。

★    280nm激發(fā)光下，蛋白以色氨酸(Trp)釋放的紫外熒光為主

★    Trp熒光光譜與其所處微環(huán)境密切相關(guān)

★    折疊狀態(tài)Trp在蛋白內(nèi)部疏水核心；蛋白去折疊后，Trp暴露到溶劑中

★    去折疊過(guò)程, Trp Emission峰值從330nm轉(zhuǎn)變到350nm，蛋白紫外熒光發(fā)生紅移現(xiàn)象

★    350nm與330nm熒光值的比值變化，即可檢測(cè)到蛋白去折疊過(guò)程

★    測(cè)定參數(shù)：Tm、Ton、Cm、ΔG等

★    條件無(wú)限制，可測(cè)定去垢劑環(huán)境中的膜蛋白

主要功能：

多功能蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析儀--PSA-16可用于評(píng)估蛋白（抗體或疫苗）熱穩(wěn)定性、化學(xué)穩(wěn)定性、顆粒穩(wěn)定性等特性，實(shí)現(xiàn)非標(biāo)記條件下的高通量的抗體制劑篩選、分子結(jié)構(gòu)相似性鑒定、物理穩(wěn)定性、長(zhǎng)期穩(wěn)定性、質(zhì)量控制、折疊和再折疊動(dòng)力學(xué)研究等功能。

★    蛋白熱穩(wěn)定性分析

★    蛋白化學(xué)穩(wěn)定性分析

★    蛋白等溫穩(wěn)定性分析

★    蛋白顆粒穩(wěn)定性分析

★    免標(biāo)記熱遷移實(shí)驗(yàn)（dye-free TSA）

★    蛋白去折疊、再折疊、結(jié)構(gòu)相似性分析

★    蛋白質(zhì)量控制分析

主要特點(diǎn)：

多功能蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析儀--PSA-16基于內(nèi)源差示掃描熒光（ifDSF）技術(shù)，廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)穩(wěn)定性研究、蛋白質(zhì)類大分子藥物（抗體）優(yōu)化工程、蛋白質(zhì)類疾病靶點(diǎn)的藥物小分子篩選和結(jié)合力測(cè)定等領(lǐng)域，具有快速、準(zhǔn)確、高通量等諸多優(yōu)點(diǎn)。蛋白質(zhì)中色氨酸/酪氨酸的熒光性質(zhì)與它們所處的環(huán)境息息相關(guān)，因此可以通過(guò)檢測(cè)蛋白內(nèi)部色氨酸/酪氨酸在加熱或者添加變性劑過(guò)程中的熒光變化，測(cè)定蛋白質(zhì)的化學(xué)和熱穩(wěn)定性。PSA-16采用紫外雙波長(zhǎng)檢測(cè)技術(shù)，可精準(zhǔn)測(cè)定蛋白質(zhì)去折疊過(guò)程中色氨酸和酪氨酸熒光的變化，獲得蛋白的Tm值和Cm值等數(shù)據(jù)；測(cè)定時(shí)無(wú)需額外添加染料，不受緩沖液條件的限制且測(cè)試的蛋白質(zhì)樣品濃度范圍非常廣（10 µg/ml - 250 mg/ml），因此可廣泛用于去垢劑環(huán)境中的膜蛋白和高濃度抗體制劑的穩(wěn)定性研究。此外，PSA-16具有非常高的數(shù)據(jù)采集速度，從而可提供超高分辨率的數(shù)據(jù)。同時(shí)PSA-16一次最多可同時(shí)測(cè)定16個(gè)樣品，通量高；每個(gè)樣品僅需要15 uL，樣品用量少，非常適合進(jìn)行高通量篩選。PSA-16操作簡(jiǎn)單，使用后無(wú)需清洗，幾乎無(wú)維護(hù)成本。

主機(jī)參數(shù)：

★    測(cè)定參數(shù)：Tm、Cm、ΔG等；

★    樣品通量：16個(gè)；

★    樣品體積：≤20 uL；

★    檢測(cè)器：檢測(cè)330+/-5 nm和350+/-5 nm兩個(gè)波長(zhǎng)的信號(hào)；

★    檢測(cè)模式：快速逐個(gè)掃描，1秒鐘采集一次信號(hào)；

★    激發(fā)光源：LED，波長(zhǎng)280 nm；

★    蛋白檢測(cè)濃度范圍：0.01-200 mg/ml；單次實(shí)驗(yàn)即可涵蓋此濃度范圍；

★    測(cè)定過(guò)程無(wú)需外源染料，無(wú)需標(biāo)記；

★    溫控范圍：15-110度；

★    變溫速度：0.1-15度/分鐘；

★    溫度準(zhǔn)確性：+0.05度；

★    Tm重復(fù)性：同一臺(tái)機(jī)器16個(gè)重復(fù)樣品CV小于1%；

★    對(duì)緩沖液條件無(wú)限制，可測(cè)定去垢劑環(huán)境中的膜蛋白；

★    能夠?qū)崿F(xiàn)熱穩(wěn)定性、化學(xué)穩(wěn)定性、膠體穩(wěn)定性、等溫穩(wěn)定性、質(zhì)量控制等測(cè)定；

★    儀器無(wú)需定期更換配件，實(shí)驗(yàn)完成后無(wú)需對(duì)儀器進(jìn)行清洗維護(hù)；

耗材參數(shù)：

★    耗材：塑料一次性耗材，無(wú)需清洗和維護(hù)；成本小于10人民幣/樣品；

★    樣品管采用高純度石英材質(zhì)，紫外透過(guò)率高，可檢測(cè)低濃度的蛋白樣品

★    一次性耗材樣品管，樣品不接觸儀器內(nèi)部，無(wú)需清洗和再生

★    八聯(lián)排設(shè)計(jì)，使用靈活，適配多通道移液器進(jìn)樣

★    可密封式設(shè)計(jì)，防止實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的樣品蒸發(fā)

應(yīng)用領(lǐng)域：

多功能蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析儀--PSA-16應(yīng)用涵蓋植物、生物學(xué)、動(dòng)物科學(xué)、動(dòng)物醫(yī)學(xué)、微生物學(xué)、工業(yè)發(fā)酵、環(huán)境科學(xué)、農(nóng)業(yè)基礎(chǔ)、蛋白質(zhì)工程等多學(xué)科領(lǐng)域。蛋白質(zhì)是最終決定功能的生物分子，其參與和影響著整個(gè)生命活動(dòng)過(guò)程。現(xiàn)代分子生物學(xué)、環(huán)境科學(xué)、動(dòng)醫(yī)動(dòng)科、農(nóng)業(yè)基礎(chǔ)等多種學(xué)科研究的很多方向都涉及蛋白質(zhì)功能研究，以及其下游的各種生物物理、生物化學(xué)方法分析，提供穩(wěn)定的蛋白質(zhì)樣品是所有蛋白質(zhì)研究的先決條件。因此多功能蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析系統(tǒng)在各學(xué)科的研究中都有基礎(chǔ)性意義。

1.    抗體或疫苗制劑、酶制劑的高通量篩選

2.    抗體或疫苗、酶制劑的化學(xué)穩(wěn)定性、長(zhǎng)期穩(wěn)定性評(píng)估、等溫穩(wěn)定性研究等

3.    生物仿制藥相似性研究（Biosimilar Evaluation）

4.    抗體偶聯(lián)藥物（ADC）研究

5.    多結(jié)構(gòu)域去折疊特性研究

6.    物理和化學(xué)條件強(qiáng)制降解研究

7.    蛋白質(zhì)變復(fù)性研究（復(fù)性能力、復(fù)性動(dòng)力學(xué)等）

8.    膜蛋白去垢劑篩選，膜蛋白結(jié)合配體篩選（Thermal Shift Assay）

9.    基于靶標(biāo)的高通量小分子藥物篩選（Thermal Shift Assay）

10.    蛋白純化條件快速優(yōu)化等

測(cè)試數(shù)據(jù)：

多功能蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析儀PSA-16推出市場(chǎng)后，在短短時(shí)間內(nèi)測(cè)試過(guò)各種不同類型的樣本，在多個(gè)客戶實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)DEMO，數(shù)據(jù)顯示測(cè)試結(jié)果良好，重復(fù)性優(yōu)異，相關(guān)參數(shù)達(dá)到甚至超過(guò)國(guó)外同類產(chǎn)品的水平。

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