13906ES65 RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號 13906ES65
- 產地 上海
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2022/6/1 11:37:30
- 訪問次數 489
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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100t |
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貨號 | 13906ES65 | 應用領域 | 制藥,綜合 |
產品信息
產品名稱
產品編號
規格
價格(元)
RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit
13906ES65
100 T
1,795.00
13906ES80
1,000 T
15,795.00
13906ES92
10,000 T
135,795.00
產品描述
本產品將LAMP可視光染料整合到buffer中,buffer中含dATP、dCTP、dGTP和dUTP等Bst II DNA Polymerase擴增必須的組分,同時包含pH 敏感指示劑,試劑盒含有無甘油Bst II DNA Polymerase、UDGase、RT enzyme等,可用于凍干反應體系的配制;同時減少了加樣操作,降低操作誤差,在極大程度上抑制假陽性反應,提高檢測的準確度。本試劑盒具有較高的擴增效率和靈敏度,擴增結果可肉眼判斷,陽性反應孔為橙黃色,陰性反應孔為洋紅色,反差極大。
產品組分
組分編號
組分名稱
產品編號/規格
13906ES65 (100 T)
13906ES80 (1,000 T)
13906ES92 (10,000 T)
13906-A
2.5×pH Sensitive Reation Buffer
1 mL
10 mL
100 mL
13906-B
無甘油RT酶Mix
30 μL
300 μL
3 mL
13906-C
無甘油Bst酶
50 μL
500 μL
5 mL
運輸和保存方法
Part I:組分13906-A【2.5×pH Sensitive Reation Buffer】干冰運輸,-20°C保存,有效期6個月。
Prat II:組分13906-B\C【無甘油RT酶Mix\Bst酶】冰袋運輸,4°C保存,有效期6個月。
注意事項
1. 使用本試劑前請仔細閱讀說明書。
2. 整個實驗,應規范操作,包括反應體系的配制、樣本處理及加樣。
3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 待檢樣本準備
核酸提取后樣本:直接作為模板,加入反應體系中。
煮沸法:臨床采集的拭子樣本直接放入水中,置于95°C水浴鍋或金屬浴中進行5 min的熱裂解,釋放核酸,混勻后即可作為模板加入反應體系中。
【注】:1)處理樣本的試劑不能使用強酸或強堿的核酸釋放劑,若必須使用,則樣本處理完后,需將樣本的pH調節至8.0。
2)加入的樣本中,避免使用Tris-HCl等高濃度的緩沖體系,避免pH指示劑不能發生變色,影響實驗結果判讀。
2. 反應體系
將A組分從-20°C取出,溶解后顛倒混勻,瞬時離心確保所有液體落到管底。根據待檢測樣品量,配制如下體系(通常實驗需要設置陰性對照和陽性對照):
組分
單次反應體積(μL)
終濃度
2.5×pH Sensitive Reation Buffer
10
1×
Bst酶
0.5
0.32 U/µL
RT酶Mix
0.3
-
10×Primers 2
2.5
1×
模板3
10 ng-1 µg
-
加ddH2O至
25
-
【注】:
1)陰性對照推薦設置空白(不加模板)對照以及NTC(一般為水)對照。
2)10×Primers:16 µM FIP/BIP,2 µM F3/B3,4 µM Loop F/B each。
3)模板加入量在1-8 µL內調整;推薦模板RNA溶解于DEPC水中。
3. 加樣
1)如果反應是在水浴鍋中進行,則每管加入20 μL礦物油(自備),以防止液體蒸發導致結果的誤差。如果反應是在PCR儀中進行,不需要加礦物油(請開啟熱蓋)。
2)為避免污染,建議用戶在超凈臺中配制組分,在其他房間的通風櫥中加入模板以免出現假陽性結果。
3)由于本試劑使用的是pH指示劑法,該試劑中的緩沖液能力較弱,試劑不可長期接觸空氣,否則會吸附空氣中的二氧化碳致使試劑變酸,導致試劑顏色變淺,影響實驗結果判讀。
4. 反應條件
溫度
時間
作用
25-37°C
2-5 min
降解含U模板
60-65°C
30 min
恒溫擴增
85°C
5 min
失活
【注】:
1)本試劑盒所用酶對溫度非常敏感,強烈建議使用PCR儀操作;如用水浴鍋,應先加熱使其達到規定溫度后再反應。溫差超過2°C,將導致擴增效率降低,使陽性反應無法在說明書規定的時間內洋紅色變成橙黃色。
2)反應溫度需要根據引物的Tm值進行調整。
3)反應時間依據模板濃度而定,低濃度模板可能需要60 min時間才能有比較明顯的反應。
5. 結果判斷
反應30 min后,立刻取出反應管,待降溫至室溫后,置于光線良好的環境中觀察(建議以白紙作為背景)。如反應液為洋紅色,則為陰性結果;如反應液為橙黃色則為陽性結果。
【注】:反應的時間必須準確計時,超過說明書規定的反應時間可能會出現假陽性。反應管不可開蓋,否則會污染,影響后續實驗。
HB220518