RAW264.7+GFP小鼠單核巨噬細胞白血病細胞綠色熒光標記

,RAW264.7 GFP

貨號：YJ-0082a

價格： 3200.0

規格： 1*10 ⁶

細胞描述

此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶GFP基因。

細胞特性

1） 來源：鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞

2） 形態：不規則圓形，紡錘狀，貼壁細胞，少量懸浮。

3） 含量：>1x106  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為穩定轉染GFP的細胞，隨細胞傳代次數的增加，其GFP熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。

建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的*培養基維持培養，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的*培養基繼續篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養基培養，至細胞密度約80%，可繼續加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥*培養基正常培養。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3）半貼細胞或貼壁不牢（懸浮）細胞：T25瓶置于37℃培養箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用*培養基重懸后打回到原培養瓶中繼續培養，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養基中懸浮的細胞離心后回收。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。 

細胞培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備

1） 準備DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺，0.11g / L丙酮酸鈉) (推薦YJ-0001)培養基；優質胎牛血清10 %；P/S青霉素-鏈霉素1%。

2） 注意事項：

（a）在細胞生長的初始階段，細胞以貼壁的形式生長并呈現出長方體的形態和有“偽足”延伸。隨著培養時間的增加，細胞呈現圓形并以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度，會有細胞以懸浮的方式散落到到培養基中，鏡下觀察會發現懸浮和貼壁的細胞會同時出現。

（b）該細胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時，用無菌細胞刮刮拭培養表面將細胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養瓶中。（c）該細胞形態上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時應收集起來，離心后細胞沉淀可以繼續培養。

（d）血清質量差異可能引起細胞貼壁能力變化，應選用高質量的胎牛血清。

3） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

4） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理

1）凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，*培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養。

該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

該細胞用細胞刮鏟替代胰酶來對細胞進行處理。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養表面將細胞刮落，收集細胞后離心去上清，重懸后接種到新的裝有新鮮培養液的培養瓶內。收貨后第一次傳代1:2進行，后續可以根據實際的情況以1:2~1:4的比例進行傳代。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。