DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡(jiǎn)介:

DIGE一雙向熒光差異凝膠電泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis ,2D-DIGE)，是在傳統(tǒng)雙向電泳的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的新型蛋白質(zhì)組學(xué)定量技術(shù)，其分離蛋白質(zhì)混合的原理與雙向電泳是一致的， 主要利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量的差異來(lái)分離蛋白質(zhì)混合物，同時(shí)應(yīng)用熒光染料的靈敏度及內(nèi)標(biāo)的使用等技術(shù)，使其在定量蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)雙向電泳。DIGE使用的熒光染料有Cy2, Cy3和Cy5,它們能與蛋白質(zhì)的賴氨酸側(cè)鏈氨基反應(yīng)而使蛋白質(zhì)被標(biāo)記，被標(biāo)記蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量幾乎不受影響，等量混合標(biāo)記好的蛋白質(zhì)后進(jìn)行雙向電泳，不同凝膠之間可以

通過(guò)cy2內(nèi)標(biāo)匹配，消除凝膠之間的差異，蛋白質(zhì)表達(dá)量的變化則通過(guò)cy3和cy5不同熒光的強(qiáng)度來(lái)體現(xiàn)。

與常規(guī)雙向電泳后，銀染或考染膠相比，DIGE具有以下優(yōu)勢(shì):

1、靈敏度高，Z低可檢測(cè)到125pg的蛋白質(zhì);

2、高效性，同一塊凝膠上可以電泳兩個(gè)樣品，減輕了工作量;

3、線性范圍更廣，動(dòng)態(tài)范圍高達(dá)10-5;

4、定量精確,采用內(nèi)標(biāo)消除了凝膠與凝膠之間的實(shí)驗(yàn)誤差，顯著提高了實(shí)驗(yàn)的精確度和可重復(fù)性;

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，ImageMaster7.0 (DIGE) 軟件可以得到統(tǒng)計(jì)學(xué)可信的結(jié)果，降低了操作者之間的偏差。

DIGE技術(shù)服務(wù)流程

DIGE技術(shù)服務(wù)內(nèi)容

1、樣本制備與定量; .

2、熒光標(biāo)記;

3、雙向電泳和圖片分析;

4、DIGE實(shí)驗(yàn)報(bào)告提交。

送樣須知:

1、技術(shù)咨詢:在您開(kāi)展實(shí)驗(yàn)之前，本公司將為您竭誠(chéng)提供有效的DIGE實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案。

2、為了保證DIGE實(shí)驗(yàn)?zāi)茼樌M(jìn)行，樣品須液氮或干冰保存寄送，

注:樣本應(yīng)避免各類污染和反復(fù)凍融。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi):

1、DIGE熒光電子圖片;

2、蛋白質(zhì)點(diǎn)定量分析結(jié)果，包括差異點(diǎn)號(hào)碼、差異倍數(shù)、pI和MW等;

3、完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括實(shí)驗(yàn)步驟、使用儀器、軟件檢索參數(shù)等。