細胞Hochest凋亡染色實驗服務

實驗技術簡介:

Hoechst染料都可在350nm左右的紫外光激發。都在461nm處發出藍靛色熒光光。Hoechst染色時無需用DAB來顯色，它直接結合細胞的DNA，經過紫外光激發后發出藍色熒光。

實驗技術原理:

Hoechst是可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。熒光染料Hoechst能少許進入正常細胞膜，使其染上低藍色，而凋亡細胞的膜通透性增強，因此進入凋亡細胞中的Hoechst比正常細胞的多，熒光強度要比正常細胞中要高，此外，凋亡細胞的染色體DNA的結構發生了改變從而使該染料能更有效地與DNA結合，并且凋亡細胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst排出到細胞外使之在細胞內積累增加等都使凋亡細胞的藍色熒光增強。

]實驗操作流程:

1、可貼壁細胞生長于含有蓋玻片的培養皿中或將非貼壁細胞懸浮培養;

2、將HOECHST加入培養皿終濃度為10ug/ml,37°C孵育30min;

3、加入4%PF與培養液1:3混合，固定細胞5-10min;

4、固定后將長有細胞的蓋玻片用封片劑封于載玻片;

5、熒光顯微鏡下觀察。

客戶提供:

1、組織樣品:新鮮組織放入液氮或-80度保存，組織不少于100mg;

2、培養細胞:通過細胞計數取不少于2x106個細胞于EP管,加入0 .5ml生理鹽水或蛋白保護劑，混勻后保存于冰箱(-80°C, 避免反復凍融) ;

3、血液細胞標本:以抗凝管保存血樣或以淋巴細胞分離液分離細胞后加入0.5m生理鹽水或蛋白保護劑，保存(-80°C可長期保存,避免反復凍融) ;

4、血清或細胞培養液標本:離心去掉雜質后取上清入EP管，保存(49C可保存15-20天，-80°C可長期保存,避免反復凍融) ;

5、石蠟切片,冰凍切片以及細胞爬片，涂片等。

6、樣本運輸:可選擇以下任何一種方式寄送標本

組織樣本、細胞樣本以干冰運輸或加入蛋白保護劑后，加冰袋寄送;

細胞樣本也可直接寄送培養瓶(密封保證不污染、培養液不漏出) ;

血清或上清液直接加冰袋寄送(送視路程遠近2-3天可到達)。

交付標準:

1、圖片;

2、完整項目報告(材料、試劑、儀器、方法、數據分析、實驗結果)。

其他:

1、Hoechst能與DNA結合，干擾DNA復制和細胞分裂，因此有致畸和致癌危險。使用和廢棄需謹慎。

2、對于貼壁細胞或組織切片,加入少量Hoechst 染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3- 5分鐘。

3、熒光物質均易發生淬滅，染色后的樣品宜避光保存。