產地類別 | 國產 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
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載體構建克隆(vectorconstruction)是分子生物學研究常用的手段之一。依賴于限制性核酸內切酶、DNA連接酶和其它修飾酶的作用,分別對目的基因和載體DNA進行適當切割和修飾后,將二者連接在一起,再導入宿主細胞,實現目的基因在宿主細胞內的正確表達。載體構建主要包括已有載體多克隆位點MCS的改造和已有載體啟動子、增強子、篩選標記等功能元件的改造。載體構建完成后可利用PCR原理進行測序驗證。
載體構建克隆實驗步驟:
1)引物設計,PCR擴增目的片段
2)酶切目的片段與載體
3)連接或重組
4)載體構建轉化
5)涂板
6)挑取克隆酶切或PCR鑒定
7)載體構建測序驗證
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