質粒轉染實驗
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- 公司名稱 上海達為科生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2022/12/23 11:40:06
- 訪問次數 999
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應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
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常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩定轉染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸轉移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復篩選,得到穩定轉染的同源細胞系。
轉染技術的選擇對轉染結果影響也很大,許多轉染方法需要優化DNA與轉染試劑比例,細胞數量,培養及檢測時間等。