供貨周期 | 一個月 | 應用領域 | 生物產業 |
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山羊抗小鼠(未標記)
編號:YKCP-201-UC
小鼠產生的抗體分子中的Fc端,相對于山羊來說,也是一個異源性物質,可以刺激山羊的免疫系統產生針對小鼠抗體分子Fc端的特異性抗體,就是山羊抗小鼠抗體的抗體,即山羊抗小鼠二抗。
山羊抗小鼠(未標記)
抗體制備(過表達體系WB應用保證)
服務編號:YKSP-1012
服務標準:
1.ELISA≥1:40000
2.抗體(抗原親和純化):3-5 mg
3. Western實驗中能夠特異性識別目的蛋白(過表達體系)
服務內容:
1. 根據蛋白序列,設計3條可能成功制備抗體的多肽序列
2. 多肽合成:每條多肽 10 mg, 純度 ≥ 85%
3. 多肽偶聯(KLH用于免疫,BSA用于檢測)
4. 4只兔子,采集免疫前血清,進行4次免疫
5. 血清小樣采集和檢測
6. 抗血清效價符合標準,采全血,分離抗血清
7. 多肽偶聯到親和樹脂
8. 抗血清用抗原親和柱純化
9. 選擇Elisa效價合格的抗體進行Western 驗證(客戶提供的過表達裂解液)
終交付的材料:
1.1-2 mg抗體;
2.1 mg多肽,0.1 mg多肽-BSA偶聯物
3.Elisa數據報告,WB檢測報告,完整項目報告
第1個要求-功能性要求:科研人員根據實驗需求提出對抗體的功能性要求;對一個抗體功能要求越多,其制備難度也就越大。
第2個要求-便利性要求:科研工作者對抗體提出需求,首先應考慮商品化抗體:優質商品化抗體一般都經過多層驗證和優化,可以直接購買使用,節約時間。一個抗體很難同時滿足幾項功能要求,這個時候可以考慮分別選購針對不同功能的抗體;除此之外,還需仔細查看抗體數據信息和實驗圖片,其實驗所采用的標本和方法與自己準備實驗的標本越相似越好。
第3個要求-抗體種屬要求: 制備多抗選用多的是兔子,單抗選用多的是小鼠,對于抗體需求量較大,比如二抗,一般選擇山羊。對于其他種屬要求,除實驗設計需求,更多是因為抗原與免疫宿主親緣關系問題,一般來說親緣關系越遠,免疫原性越好。
第4個要求-品質性要求:大部人認為單抗比多抗好,其實也不盡然。單抗的特異性好,對于需要區分鑒定同源性較高的抗原或者對于特異性要求較高時,一般選擇單抗;另外,單抗性質比較穩定,理化性質均一(所有的抗體都是由相同細胞分泌出來)。多抗的優點是效價和靈敏度高,其針對一個抗原的多表位;與單抗相比,待檢標本中同樣的蛋白表達豐度,多抗會有更多抗體分子與抗原結合,信號更強,當然也可能引起非特異性問題。
第5個要求-可能性要求:好的抗原是制備優質抗體的前提,在制備抗體之前必須有可能制備出好的抗原。如果已經有抗原,可以直接免疫動物;如果沒有抗原需要從其已獲得的信息或者材料入手制備抗原:序列信息-基因-重組表達-蛋白純化-動物免疫。對于同源序列較高的蛋白序列也可以考慮通過設計合成多肽偶聯載體制備抗原。制備的抗原都是通過人工合成或者生物反應器得到的“模擬抗原”,與天然抗原還是有一定的差異的。獲得天然抗原的辦法可以直接從組織或標本中提取蛋白,前提是這個蛋白在標本中表達量大且其理化性質穩定。
第6個要求-可評價要求:篩選方案和純化方法對抗體制備至關重要,質檢方法決定一個抗體的命運,你用什么篩選方法你就得到什么樣的抗體,所以在抗體制備之前必須要保證建立一個科學穩定符合質檢要求的抗體制備方法。
后一個要求-可行性要求:制備抗體前必須要擁有制備流程所必須的平臺設備以及專業人員,如果實驗室以前沒有涉及這塊并且以后也不打算建設此類平臺,本著“專業人做專業事成本”的原則,抗體制備的整個流程或者部分環節還是委托給專業公司。