寨卡病毒IgM檢測試劑盒

通用名稱：寨卡病毒IgM ELISA試劑盒（捕獲法）
英文名稱：ZIKV DetectTM22.0  IgM Capture ELISA
產品規格：96T
產品貨號：900223
產品品牌：美國Inbios

預期用途

此檢測試劑盒用于定性檢測人血清中抗寨卡病毒IgM抗體。還檢測符合疾病控制中心和預防中心（CDC）臨床和/或流行病學標準。僅用于科研，不作臨床診斷。

檢測原理

這一試劑盒是一種酶聯捕獲免疫測定法，用于檢測靶向ZIKV包膜糖蛋白的人類IgM抗體。微量滴定孔預包被有抗人IgM的多克隆捕獲抗體。將陽性質控，陰性質控和未知測試樣品用樣品稀釋緩沖液稀釋，然后加入適當位置的孔中。溫育和洗滌后，分別加入即用型（RTU）ZIKV抗原（Zika Ag），交叉反應性質控抗原（CCA）和正常細胞抗原（NCA）到每個相應的孔中。

溫育和洗滌后，將每種孔中加入即用型二抗溶液。在隨后的溫育和洗滌步驟后，將包含辣根過氧化物酶標記的抗小鼠抗體的酶聯物溶液加入到每個孔中。洗滌后，將孔與四甲基聯本胺（TMB）底物孵育。然后加入酸性終止溶液，并通過450nm處的吸光度測量來確定結果。如果存在靶向ZIKV包膜糖蛋白的人IgM抗體，則形成由IgM，抗原，第二抗體和酶聯物組成的復合物。如果靶向ZIKV包膜糖蛋白的IgM抗體不存在，則將抗原，抗體和酶聯物洗掉。結果分析包括原始OD450值和比較樣品與給定抗原的反應性以正確分類樣品的比率。

寨卡病毒IgM檢測試劑盒組成成分
1、微孔板——12 x 8——用對人IgM特異的捕獲抗體預包被。
2、陰性質控——1x50ul——用于驗證實驗的有效性，使用前短暫離心以去除任何的沉淀物。
3、陽性質控——1x50ul——用于驗證實驗的有效性，使用前短暫離心已去除任何的沉淀物。
4、樣品稀釋液——1x25mL——用于稀釋所有的血清樣本和質控品。在2-8℃儲存，效期內有效。
5、即用型寨卡病毒重組抗原——1x3mL——該瓶含有包含Zika包膜糖蛋白的即用型（RTU）ZIKV抗原（Zika Ag）。
6、交叉反應質控抗原（CCA）——1x3mL——含可交叉反應的質控抗原。有助于結果解釋。
7、正常質控抗原（NCA）——1x3mL——含正常質控抗原，有助于結果解釋。
8、即用型二抗——1x9mL——含有靶向黃病毒抗原的二抗。
9、酶聯物濃縮液（100 x）——1x150ul——含有HRP標記的抗鼠抗體，使用前充分混勻，在酶聯物稀釋液中稀釋。
10、酶聯物稀釋液——1x9mL——用來稀釋酶聯物濃縮液。
11、洗滌濃縮液（10 x）——1x120mL
12、底物液——1x12mL——對光敏感。
13、終止液——1x9mL——用來終止反應。


檢測步驟
1、陽性質控和陰性質控針對于Zika Ag、CCA和NCA三種抗原須做雙孔檢測，而樣品只做單孔檢測即可。
2、將板條做好標記。詳見“排版示例”。
3、按照標記好的微孔，每孔加入50ul相應的陽性質控、陰性質控和樣品，注意避免產生氣泡。
4、完成后蓋上保鮮膜。
5、放在37℃（±2℃）溫育箱中溫育1小時（±5分鐘）。注意：微孔板不能疊加放置溫育，必須單獨平鋪進行溫育，不能使用CO2或其他氣體的溫育箱進行溫育。不能將微孔板放置在任何潮濕的物品上。
6、溫育完成后，用洗板機每次每孔300ul洗滌液洗板，共洗6次。
7、按照之前的分布，使用多通道移液器每孔加入50ul的Zika Ag、CCA及NCA，詳見示例排版。
8、重復步驟4
9、重復步驟5
10、重復步驟6
11、使用多通道移液器，每孔加入50ul即用型的二抗。
12、重復步驟4
13、重讀步驟5（孵育時間為30min）
14、重復步驟6
15、使用酶聯物稀釋液1:100倍稀釋酶聯物，按照需要的量配制，現配現用。
16、使用多通道移液器，每孔加入50ul新鮮配制的酶聯物
17、重復步驟4
18、重讀步驟5（孵育時間為30min）
19、重復步驟6
20、使用多通道移液器，每孔加入75ul的TMB底物液
21、室溫（20-25℃）避光溫育20分鐘，無需封板。
22、使用多通道移液器，每孔加入50ul的終止液，室溫溫育至少1分鐘。30min內讀取OD值，超過30min會影響實驗結果。
23、450nm處酶標儀讀數。注意：請勿對空白孔或空白值調零，不能使用參考波長。否則會導致CCA和NCA的值降低和不正確的ISR值。

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