REH 人急性非B非T淋巴細胞白血病細胞特性

1） 來源：白血病

2） 形態：淋巴母細胞樣，懸浮生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發現污染，請及時拍照與我們聯系。

細胞用途：僅供科研使用。

REH 人急性非B非T淋巴細胞白血病細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查發貨培養瓶的狀況，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態的依據。

3） 觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基）。

6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。  收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 。  

細胞培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640（推薦iCell-128-0002 含NaHCO3 1.5g/L）培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 注意:這個細胞對1640培養基中碳酸氫na的含量需求是1.5g/L，購買和準備培養基的時候要注意碳酸氫na的含量。過多的碳酸氫na不利于細胞的生長。

3） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

4） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養，補加培養基至6ml。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%，即可進行傳代培養。

注：di一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為類；

1，細胞凍存時，取上清，可使用血球計數板計數。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產品和技術服務：

一、原代細胞服務
      各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源；
      多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源；
      原代細胞分離和培養相關試劑、kit、培養基添加劑等；
      原代細胞相關技術服務和整體實驗外包服務；

二、細胞株/系服務
      細胞株/系培養、增殖、凍存和相關說明書；
      細胞系培養過程的技術指導；
      細胞系培養基、添加劑、血清及相關生長因子、試劑等；

三、iPS細胞
      iPS細胞基礎培養（有滋養層or無滋養層在）；
      iPS細胞增殖及冷凍保存；
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四、技術外包服務：各類細胞生物學實驗、分子生物學實驗、顯微鏡拍照服務等

五、其他：根據客戶需要定制服務等