NanoPro 1000 超微量蛋白磷酸化分析系統

在細胞生物學功能研究中，有許多常規的研究手段,如流式,生物質譜,雙向電泳,蛋白芯片等技術。隨著研究的深入，科學家們特別需求進行真正意義上的高靈敏,高精度研究手段，力求通過一次實驗，快速發現更多的信息：鑒定結果更為可信，靈敏度更加提高來鑒定更多低豐度蛋白，更多的修飾信息，結構信息等。傳統分析技術具有很多局限性,如雙向凝膠電泳(2DE),對疏水性蛋白、堿性蛋白、特別是低豐度蛋白等無能為力，成為蛋白質組研究的瓶頸;而質譜分析技術也是由于靈敏度等問題,需要大量的樣品等原因,十幾年來一直對研究低豐度調控蛋白缺乏信心.

相同的Western, 不同的生物學實驗結果

另外, 傳統蛋白分析技術所用的蛋白量需來自成千上萬個細胞。所得結果分辨率及重復性不理想。各種蛋白分析法所需樣品量如下：

1.質譜儀樣品量100000 個細胞
2.細胞儀樣品量：10000 個細胞
3蛋白電泳，樣品量：5000 個細胞
4.蛋白芯片樣品量：1000個細胞

ProteinSimple公司的NanoPro 1000 超微量蛋白磷酸化分析系統為蛋白功能和信號通路研究提供了一個全新的研究方案。傳統的蛋白研究方法需要成千上萬的細胞，而NanoPro 1000系統每次分析僅需要25個細胞。
并可對超微量珍貴樣品的信號轉導蛋白之特性直接檢測，適用各種樣品包括：
1.原代細胞
2.FACS 分選細胞
3.穿刺抽取之腫瘤細胞
4.顯微切片組織細胞
5.分離的干細胞群

系統利用毛細管樣品定位及分析技術,結合毛細管分離及化學發光檢測原理進行納米級的自動化實驗，避免了人為操作誤差，有效提高檢測結果的精確性和重復性。過去蛋白檢測儀無法檢測到的信息，如細胞內控制通路的調控信息，可由此精確測得。
技術被用來分析信號轉導過程中所涉及的蛋白構象上的極細微變化。Nano1000為結構緊湊的臺式分析系統。
從新的角度分析蛋白調控機制，Nano技術采用等電點電泳的方法將不同構象的蛋白分離。該方法大大推進了多個領域的研究，包括：
藥物開發-篩選激酶抑制劑藥物的作用靶點
生物標記物的發現和確認-觀察疾病引起的蛋白構象的細微變化，研究其發病機制
腫瘤蛋白活性-研究組織和細胞中腫瘤蛋白的調控機制翻譯后修飾的研究-檢測蛋白構象改變引起的等電點極細微的變化

1000將蛋白分離與檢測技術相結合:
將毛細管等電點電泳和化學發光免疫測定這兩種常用的蛋白檢測技術相結合。等電點電泳可將不同構象的蛋白分離。分離后蛋白被儀器固定在毛細管壁上，接著用化學發光免疫的方法檢測蛋白。這為信號轉導蛋白的檢測提供了新的視角。


【操作流程】
1.上樣
每個毛細管中加400nl樣本混合物，包括樣本、熒光標記PI和兩性電解質。
2.分離
毛細管兩端加電壓，樣本中的蛋白質隨著自身等電點的不同，加以分離。
3.固定
毛細管在紫外光照射下，其毛細管壁上的‘化學物質被激活，從而將分離的蛋白異構體固定在毛細管壁上。
4.免疫標記
用洗脫液將非特異結合的蛋白質洗脫，將固定的蛋白質進行免疫反應，加入發光催化劑誘導其化學發光，發光信號被CCD攝像機拍攝下來。
5.結果分析
通過專業的軟件，對結果進行定量分析