非洲綠猴腎細胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2培養
- 公司名稱 上海研生實業有限公司
- 品牌 ATCC
- 型號
- 產地 進口/國產
- 廠商性質 經銷商
- 更新時間 2018/5/8 16:19:06
- 訪問次數 295
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細胞名稱 非洲綠猴腎細胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2培養
形態特性 上皮樣細胞
品牌 貼壁生長
特征特性 Vero-HCV-E2細胞整合有丙型肝炎病毒的E2基因,能穩定表達E2蛋白,是HCV基礎研究的*摸型。它由武漢大學病毒學國家重點實驗室郭佳博士于2008年構建并保存。
培養條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C40
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原
非洲綠猴腎細胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2培養貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
Anti-FOXO4/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白4抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-NKG2D/CD314 /FITC 熒光素標記NK細胞受體/自然殺傷細胞活化性受體抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh BTBD17 BTB/POZ結構域蛋白17抗體 規格 0.2ml
ASPP2(apoptosis stimulating protein of P53 2) P53凋亡刺激蛋白2抗原 0.5mg
HE4 英文名稱: 附睪分泌蛋白4抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh RIT1 RIT1蛋白抗體 規格 0.2ml
Anti-NKG2D/CD314 /FITC 熒光素標記NK細胞受體/自然殺傷細胞活化性受體抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
INH-A(Mouse Inhibin) ELISA Kit 小鼠抑制素AMulti-class antibodies規格: 48T
Anti-CD170/Siglec-5/FITC 熒光素標記唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素5抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Donkey Anti-human IgG/APC APC標記的驢抗人IgG 規格 0.1ml
PV ELISA Kit 魚卵黃高磷蛋白 96T
MeCP2 英文名稱: 甲基化CpG結合蛋白2抗體 0.1ml
ARHGAP20 英文名稱: Rho GTP酶激活蛋白20抗體 0.2ml
Anti-CD170/Siglec-5/FITC 熒光素標記唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素5抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rabbit Anti-human k-chain 兔抗人k-鏈 1mg
Laminin 2 alpha 英文名稱: 層粘蛋白α2抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh DOK3 對接蛋白3抗體 規格 0.2ml
AECA(Mouse anti-endothelial cell antibody) ELISA Kit 小鼠抗內皮細胞抗體Multi-class antibodies規格: 48T
phospho-alpha B Crystallin (Ser59) 英文名稱: 磷酸化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質/α-晶體蛋白b鏈抗體 0.1ml
Anti-Phospho-c-Fos (Ser32) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化c-fos抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
MT ELISA Kit 大鼠金屬硫蛋白Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-MAP1A 微管相關蛋白1A抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的羊抗雞IgG 規格 0.1ml
EK(Human epidermal keratin) ELISA Kit 人表皮角蛋白 96T
Nestin 英文名稱: 巢蛋白/神經上皮干細胞蛋白抗體 0.1ml
BRCA1 英文名稱: 癌易感基因1抗體 0.1ml
Anti-MAP1A 微管相關蛋白1A抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。