EPO紅細胞生成素檢測試劑盒

【產(chǎn)品規(guī)格】

96T

【預期用途】

該試劑盒可用于人血清中紅細胞生成素的體外定量檢測。可輔助診斷貧血和紅細胞增多癥。隨著重組EPO的出現(xiàn)，它可作為生物治療增加紅細胞數(shù)量，那么EPO試驗就可用于輔助貧血癥病人的預測和用藥過程的觀察

【前言簡介】

EPO是分子量為30000-340000道爾頓的糖蛋白，人EPO是由165個氨基酸組成的多肽，包含有一個O-連接和3個N-連接的糖鏈。重組EPO在免疫試驗中是天然蛋白的良好替代品。血清中的EPO水平由蛋白的生成率和清除率決定，90%的EPO由成人腎臟的腎小管細胞產(chǎn)生，組織氧化中會降低。現(xiàn)象表明，這些細胞中用于檢測血氧飽和度的蛋白是一種血紅素基團，隨著血漿中的氧分壓的降低，EPO濃度會增加，這也提示我們在正常的細胞內(nèi)，血清中EPO濃度與紅細胞量呈負相關關系。

血清中EPO濃度的定量檢測可輔助貧血或紅細胞增多癥的診斷。再生障礙性貧血，溶血性貧血和貧血都是由于缺鐵導致海拔血清EPO。而繼發(fā)性貧血患者體內(nèi)的EPO水平是由于腎功能衰竭和其他疾病如獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）引起，這就是zui有可能由于腎臟受損而引起的EPO大量產(chǎn)生的原因。低濃度的EPO可對腎移植排斥反應做出早期預警，還可以用于監(jiān)測艾滋病人使用AZT的治療過程，EPO濃度的增加表明貧血與AZT治療相關聯(lián)是由于紅細胞發(fā)育不全或apliasia

紅血球增多癥，或原發(fā)性紅細胞增多癥（紅細胞量增加）起因于紅細胞未受到刺激，因此，血紅蛋白的增加引起EPO的減少，導致血清中EPO水平降低。繼發(fā)性紅血球增多癥，也是總紅細胞數(shù)增加，循環(huán)EPO水平提高的生理反應，引起了組織缺氧，缺氧因素可能有肺纖維化，心血管疾病，長期暴露在高海拔地區(qū)，異常形式的血紅蛋白和藥物治療。一些腫瘤也會產(chǎn)生EPO，這種情況下，EPO可作為監(jiān)測有效治療的腫瘤標記物。

【檢測原理】

此試劑盒采用的是雙位點酶聯(lián)法，檢測具有生物活性的EPO氨基酸鏈，采用兩種不同的鼠單抗與人EPO特異性結合。一個是生物素標記的鼠單抗，另外一個是HRP標記鼠單抗。

試驗中，標準品，質(zhì)控品或是樣品與酶標抗體和生物素標記抗體一起在鏈霉親和素包被的微孔板內(nèi)孵育，孵育結束后，洗去未結合的成分，再加入TMB底物液孵育，終止液加入終止反應，顏色變?yōu)辄S色。黃色強度與樣品中的EPO成正比，標準品的濃度和OD值繪制標準曲線，質(zhì)控和樣本中的EPO濃度可直接從標準曲線上讀取。標準品已經(jīng)WHO EPO標準認證，WHO參考標準品是EPO*標準（87/684）

【試劑盒成分】

1. 試劑1（RTG1），生物素標記的EPO抗體（抗人EPO鼠單抗），1x3.5ml,Proclin 300作為防腐劑

2. 試劑2（RTG2）,1x3.5ml，HRP標記抗體(抗人EPO鼠單抗)

3. 試劑A（RTG A），1x30ml，洗滌濃縮液

4. 試劑B（RTG B）, 1x20ml，TMB底物液

5. 終止液（SOLN），1x20ml，1N硫酸

6. 微孔板（PLA），12x8孔

7. 標準品（CAL），標準品A：0mIU/ml，1x4ml；標準品B-F，1x2ml，具體濃度見標簽。凍干，合成h-EPO，零標準品是蛋白緩沖液，其他的標準品則是含有合成物h-EPO（1-165）的蛋白緩沖液

8. 質(zhì)控品（CTRL），質(zhì)控1&2，凍干，2ml/支，含含有合成物h-EPO（1-165）的蛋白緩沖液，含有環(huán)丙沙星防腐劑

實驗所需材料但試劑盒未提供

1. 450nm和405nm的酶標儀

2. 洗板機

3. 移液器，25；200；100；150ul

4. 多通道移液器，25；100；150ul

5. 計時器

6. 去離子水或蒸餾水

7. 振蕩器

【注意事項】

1. 實驗前認真閱讀實驗說明書，嚴格按照要求操作才能得到好的實驗結果

2. 高低質(zhì)控在每次實驗都應檢測，可便于評估實驗結果的可靠性

3. 試劑的配制或稀釋應用去離子水或雙蒸水

4. 處理試劑盒樣本時應戴手套，減少傷害

5. 實驗前將所有試劑和樣本平衡至室溫，混勻，避免反復凍融

6. 每次試驗都應建立標準曲線

7. 每次試驗都應做質(zhì)控，并確保結果在質(zhì)控范圍內(nèi)

8. 操作不當，加樣量不準，洗板不*，試劑貯存不當都會影響到質(zhì)控結果不在可接受范圍

9. 酶標儀讀數(shù)時，若存在有氣泡則會影響OD值，讀數(shù)前小心移除所有氣泡

10. 底物液光敏感物質(zhì)，應避光保存，穩(wěn)定性降低或污染會導致試劑顏色變藍，而不能再用

11. 加底物液和終止液時，避免接觸到金屬材料

12. 避免試劑交叉污染，每次加樣時都采用新的槍頭

13. 不要將不同批次的試劑混合，不要使用過期的試劑

14. 所有試劑廢物的處理應嚴格按照國家規(guī)定實施

【參考文獻】

1. Sawyer, S.T., Krantz, S.B., Sawada, K. Receptors for Erythropoietin in Mouse and Human Erythroid Cells and Placenta. Blood 1989; 74: 103-109.

2. Imai, N., Kawamura, A., Higuchi, M., et al. Physicochemical and Biological Comparison of Recombinant Human Erythropoietin with Human Urinary Erythropoietin. J Biochem 1990; 107: 352-359.

3. Jacobson, L.O., Goldwasser, E., Fried, W., Pizak, L.F. The Role of the Kidney in Erythropoiesis.Nature 1957; 179: 633-634.

4. Koury, S.T., Bondurant, M.C., Koury, M.J. Localization of Erythropoietin Synthesizing Cells in Murine Kidney by in-situ Hybridization. Blood 1988; 71: 524-527.

5. Goldberg, M.A., Dunning, S.P., Bunn, H.F. Regulation of the Erythropoietin Gene: Evidence that the Oxygen Sensor is a Heme Protein. Science 1988; 242: 1412-1415.

6. Erslev, A.J., Caro, J., Birgegard, G., Silver, R., Miller, O. The Biogenesis of Erythropoietin.Experimental Hematology 1980; Suppl 8: 1-13.

7. Spivak, J.L. The Mechanism of Action of Erythropoietin. Int J Cell Cloning 1986; 4: 139-166.

8. Erslev, A.J. Erythropoietin. New Eng J Med 1991; 324:1339-1344.