ClonePix 2高通量細胞克隆篩選系統

ClonePix 2高通量細胞克隆篩選系統全自動的篩選流程可以在更短時間內篩選更多克隆。經過已有用戶證明，可以顯著提高篩選效率、克隆產量，并節省時間和成本。

主要特性：

1.更短時間篩選更多克隆

2.優質圖像結合智能化分析軟件

3.準確、自動化克隆挑選，避免有限稀釋,

4.增加生物治療藥物細胞系的產量

創新的篩選流程更少時間篩選更多克隆

縮短細胞系和抗體開發時間

挑取表達水平更優的細胞克隆

1.使用半固體培養基培養細胞，獲得獨立的單個細胞克隆

2.可以快速篩選上萬個克隆

 - 大大增加找到更優克隆的概率

 - 白光成像用于識別克隆位置

 - 熒光成像用于定量表達水平

3.多種檢測方法可選

 - 不用標記，直接檢測雜交瘤分泌的 IgG 或抗原特異性 MAbs

 - 檢測加入標記的重組蛋白或表達的熒光標記蛋白

4.客觀的成像分析，使用戶可以準確篩選到更優表達水平的克隆，并盡可能早的排除表達水平低的干擾克隆

5.根據克隆表達水平自動排序，并準確、自動化挑取克隆，避免有限稀釋的繁瑣和出錯幾率。

滿足藥品監管的要求

針對人 IgG 的項目，使用不含動物源成份的試劑：CloneMedia，CloneMatrix，Recombinant CloneDetect 以及 XP media。

確保形成獨立的單克隆

使用 CloneMedia 半固體培養基培養細胞，有利于增加鋪板效率和形成獨立單個克隆，有利于克隆識別和挑取。

1.基于多種基礎培養基，針對 ClonePix 系統的應用進行專門優化

2.適用于多種細胞，經過優化和驗證的培養基可選：Per.C6，CHO-s，CHO DG44，HEK，CHOK1SV，雜交瘤以及骨髓瘤細胞等

3.有標準成份，無動物源成份以及無谷氨酰胺成份等多種培養基可選,

4.使用 CloneMatrix 甲基纖維素濃縮液，用戶自己配制特殊用途培養基

CloneMedia 培養基獲得的克隆，使用 CloneSelect Imager 成像

不同于傳統的培養方法，半固體培養基的細胞鋪板密度更高，并且可以保證形成獨立的單個克隆，有利于下一步單克隆的挑取。

一個成熟的培養方法

使用半固體培養基培養細胞形成克隆，這種方法已經非常完善：

“EASIER TO PLATE OUT LARGE NUMBERS OF CELLS AND TO RECOVER MANY INDEPENDENT HYBRIDOMA CLONES”

A simple, single-step technique for selecting and cloning hybridomas for the production of monoclonal antibodies (J. Immun. Methods (1982) 50, 161-171)

目標蛋白檢測

使用基于熒光的方法檢測分泌蛋白

熒光耦聯的 CloneDetect 檢測試劑可以原位檢測分泌表達的人、小鼠以及大鼠抗體。因為克隆本身不需要產生熒光，所以不需要對目標蛋白加入額外熒光標記分子。

1.根據實驗檢測要求以及表達蛋白類型，選擇合適的檢測試劑，比如 FITC 標記抗人檢測試劑

2.加入液體檢測試劑到半固體培養基

3.對克隆進行成像、分析并根據所有克隆的熒光信號水平進行排序

檢測方法的選擇

檢測分泌 IgG 的單克隆抗體

高質量成像，智能化分析

成像

1.白光和熒光成像可以用于計算克隆的大小以及熒光強度（代表目標蛋白的表達量）。

數據顯示

1.軟件根據克隆的熒光強度、大小等物理參數對克隆自動進行排序，得到所有克隆的 2D 柱狀圖表。

2.克隆的篩選和選取主要依據以下參數：

- 大小，邊緣圓度以及克隆距離

- 根據熒光強度排序

- 用戶可以通過軟件中設置“proximity”的值，去掉距離太近的克隆

數據追蹤

1.軟件自動將所有克隆的統計信息排列成表，可以隨時導出想要克隆的信息

2.軟件按照用戶自定義的順序挑取克隆到 96 孔板，并自動記錄克隆來源、位置信息以及熒光強度等統計學參數

克隆挑取和轉移

1.用戶可以根據成像數據和統計分析的結果自定義要挑取的克隆數目和挑取順序

2.系統自動選擇用戶自定義的克隆，并將每個克隆轉移到 96 孔目標微孔板，用于培養后進一步分析或克隆擴大培養

3.XP Medi a CHO Growth A 是針對 CloneMedi a CHO Growth A 半固體培養基專門優化，適用于挑取克隆進一步放大培養的液體培養基，可以獲得更好的挑取后生長效果。

快速篩選特異性抗體克隆

ClonePix 系統可以從融合后自動化篩選，一步找到目標雜交瘤克隆；是一個高效的自動化篩選方法。

1.篩選更多克隆——發現更多的陽性克隆

2.實驗過程更加快速高效，e.g.7-10 天可以篩選到 100-500 個特異性雜交瘤克隆

3.通過避免陽性克隆的丟失以及早期排除陰性克隆，大大節省下游工作時間和成本

4.原位篩選抗原特異性或者分泌 IgG 雜交瘤——適用于多種類型抗原分子（從 160 KD 的復合體蛋白到 2.6 KD 的磷酸肽）

快速檢測抗原特異性IgG克隆

FITC 標記 60 KD 抗原

快速從退化克隆中篩選高產克隆

一些雜交瘤細胞系在 MAb 的產量方面退化嚴重，或者分泌性比較差。已有用戶使用 ClonePix 系統從退化的克隆中成功恢復了高產克隆株。

增加生物藥物細胞系的產量

ClonePix 系統相比傳統方法，可以在短時間內篩選更多的克隆，能夠大大增加找到稀少的高產克隆的概率。通過下面的實例 (MedImmune LLC)，比較了傳統的有限稀釋和 ClonePix系統的有效性。

更短時間篩選更多克隆

原位熒光顯示高產細胞株，早期排除不需要的克隆

在工藝進一步優化前即獲得高產克隆 (NS/O: 4-5 g/L，CHO: 5-6 g/L)

細胞系穩定性

表達量不穩定是細胞系篩選早期階段的主要問題。ClonePix 系統可以直觀分析克隆的穩定性。

把篩選到的克隆鋪到半固體培養基，4-7 天培養后，使用 ClonePix 進行成像分析，比較子代克隆和親代克隆的表達量，驗證克隆穩定性。也可以培養 7-14 天后，重新對亞克隆進行篩選。

經過兩輪篩選之后穩定性細胞系數據