sh 腫瘤標志物ELISA試劑盒
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- 公司名稱 上海雙贏生物試劑有限公司
- 品牌
- 型號 sh
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2017/4/26 18:54:50
- 訪問次數 1003
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腫瘤標志物ELISA試劑盒對檢測標本的測定十分廣泛，標本形態均為液體。大部分 ELISA 檢測均以血清為標本（血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清），這是因為血清標本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得，來源方便，操作簡單。但不可因為簡單而掉以輕心，血清標本宜在新鮮時檢測，應注意避免溶血，保存血清自采集時就應注意無菌操作，也可加入適當防腐劑。
腫瘤標志物ELISA試劑盒操作步驟：
實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
注意事項：
1） 在收集標本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。
2） 我們提倡新鮮標本盡早檢測，對收集后及時進行檢測。 1-3 天左右檢測的樣本可儲存在 4℃ 備用。如有特殊原因需要周期性收集標本，請將標本及時分裝后放在 -20℃ 或 - 70℃ 條件下保存，避免反復凍融。
實驗技巧：腫瘤標志物(TumorMarker)是反映腫瘤存在的化學類物質。它們或不存在于正常成人組織而僅見于胚胎組織，或在腫瘤組織中的含量大大超過在正常組織里的含量，它們的存在或量變可以提示腫瘤的性質，借以了解腫瘤的組織發生、細胞分化、細胞功能，以幫助腫瘤的診斷、分類、預后判斷以及治療指導。
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