原位雜交(BCIP/NBT)
- 公司名稱(chēng) 上海信帆生物科技有限公司
- 品牌 GEMIG
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2024/11/22 15:15:22
- 訪問(wèn)次數(shù) 1067
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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原位雜交(BCIP/NBT)
服務(wù)介紹:
原位雜交原理:原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知序列核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。
名稱(chēng) | 規(guī)格 |
原位雜交(BCIP/NBT) | 張 |
實(shí)驗(yàn)流程:
1、組織固定:組織取出洗凈后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。
2、脫水:組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟,包埋。
3、切片:石蠟經(jīng)切片機(jī)切片,攤片機(jī)撈片,62°烤箱烤片2h。
4、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。
5、消化:根據(jù)組織固定時(shí)間長(zhǎng)短,切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘,自然冷卻。后基因筆畫(huà)圈,根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性,滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30 min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。
6、預(yù)雜交:滴加預(yù)雜交液,37°C孵育1h。
7、雜交:傾去預(yù)雜交液,滴加含探針雜交液,恒溫箱 37度雜交過(guò)夜。
8、雜交后洗滌:洗去雜交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多,可以增加甲酰胺洗滌。
9、滴加封閉液:滴加封閉血清正常兔血清。室溫30min。
10、滴加鼠抗地-高辛標(biāo)記堿性磷酸酶(anti-DIG-AP):傾去封閉液,滴加anti-DIG-AP。37°C孵育40min,后TBS洗4次×5min。
11、BCIP/NBT顯色:滴加BCIP/NBT顯色液,顯微鏡觀察陽(yáng)性。后純水沖洗。
12、復(fù)染細(xì)胞核:滴加核固紅染液,染核至合適程度后純水沖洗。
13、封片:自然風(fēng)干后,中性樹(shù)膠封片。
14、顯微鏡檢,圖像采集分析。
結(jié)果判讀:
陽(yáng)性為藍(lán)色,藍(lán)紫色。細(xì)胞核為紅色。
送樣要求:
1、切片前處理要求:新鮮組織干冰運(yùn)輸后做冰凍切片;或取2mm左右厚度的新鮮組織,5min內(nèi)投入原位雜交固定液內(nèi)固定,4℃低溫保存運(yùn)輸,切勿冷凍結(jié)冰,盡快包埋切片后進(jìn)行原位雜交實(shí)驗(yàn),固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)影響核酸檢出率;
2、冰凍切片:冰凍切片-20℃運(yùn)輸;
3、石蠟切片:石蠟切片常溫運(yùn)輸;
4、細(xì)胞爬片:細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后,換無(wú)酶PBS,密封,4℃運(yùn)輸。
單據(jù)填寫(xiě):
1、探針合成:需提供待測(cè)目的基因序列或基因登錄號(hào)、所需標(biāo)記類(lèi)型;
2、自帶探針需告知完整探針信息;
3、寫(xiě)明檢測(cè)要求。