玉米赤霉烯酮（ZON）ELISA檢測(cè)試劑盒
（貨號(hào)：MZ570）

本試劑盒用于定量檢測(cè)樣本中玉米赤霉烯酮?dú)埩簟?/span>

檢測(cè)樣本：谷物、飼料、酒糟

樣本前處理：

-研磨、甲醇-水溶液提取、過濾或離心；

分析時(shí)間：15分鐘（不包括樣本前處理時(shí)間）

檢測(cè)限：

-谷物：25ppb

特異性：交叉反應(yīng)率（%）

1. 檢測(cè)原理

本試劑盒在預(yù)包被特異性玉米赤霉烯酮抗體的微孔內(nèi)進(jìn)行。將酶標(biāo)玉米赤霉烯酮和標(biāo)準(zhǔn)品或樣本在預(yù)混合孔混合后轉(zhuǎn)移到包被玉米赤霉烯酮抗體的微孔，孵育時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本中的玉米赤霉烯酮和酶標(biāo)玉米赤霉烯酮競(jìng)爭(zhēng)微孔上的玉米赤霉烯酮抗體結(jié)合位點(diǎn)，洗板除掉所有未結(jié)合的酶標(biāo)玉米赤霉烯酮或自由玉米赤霉烯酮分子。然后加入一定量顯色底物反應(yīng)以檢測(cè)酶活性。加終止液終止反應(yīng)，450nm波長(zhǎng)酶標(biāo)儀檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的玉米赤霉烯酮濃度與吸收光強(qiáng)度成反比。

2.試劑盒組成
微孔板：96孔，預(yù)包被玉米赤霉烯酮抗體。板條可拆開單獨(dú)使用。

預(yù)混合板：空白，未包被抗體。

玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)溶液：5瓶，各1.5ml，濃度分別為：0ppb，25ppb，100ppb，500ppb，2000ppb。

酶偶聯(lián)物：1瓶，14ml。

10X濃縮洗液：1瓶，50ml。

顯色液：1瓶，15ml。

終止液：1瓶，9ml。

3.需要使用但試劑盒不提供的試劑和設(shè)備
-甲醇

-蒸餾水或去離子水

-NaCl

-天平

-研磨器

-搖床（可選）

-臺(tái)式離心機(jī)或Whatman 1濾紙

-恒溫箱

-氮吹儀

-20-200μl、100-1000μl移液器及吸頭
-50-300μl多道移液器及吸頭
-含450nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀

4.注意事項(xiàng)
-僅用于體外檢測(cè)。
-一些試劑內(nèi)含防腐劑；終止液內(nèi)含有硫酸，具有腐蝕性；酶偶聯(lián)物對(duì)身體有害。
-小心操作，避免試劑接觸皮膚、眼睛和粘膜。

5.操作和存儲(chǔ)說明
-2-8°C冷藏保存，切勿冷凍。
-將未用完的板條用試劑盒提供的鋁箔袋重新密封。
-切勿使用過期產(chǎn)品。
-不同批次試劑盒內(nèi)的成分不能混用。
-請(qǐng)使用試劑盒內(nèi)提供的說明書。

6.樣本前處理步驟

-將樣本混合均勻并充分研磨；

-稱取50g研磨樣本，并加入10g NaCl，再加入250ml 70%甲醇溶液。可選方案：稱取5g研磨樣本，并加入1g NaCl，再加入25ml 70%甲醇溶液。

-充分振蕩3分鐘。

-選擇下列步驟的其中一個(gè)：1）過濾樣本（Whatman 1）并收集濾液；2）3500g離心力下離心5分鐘，并收集上清液。如果濃度范圍在10-2000ppb，所得濾液或上清液可直接用于檢測(cè)。否則，用70%甲醇溶液稀釋樣本5倍，以獲得125-10000ppb濃度范圍。

建議樣本的稱取量為50g，以使得到更具代表性的樣本。

7．工作溶液準(zhǔn)備

玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品：即用；

酶偶聯(lián)物：即用；

洗液：用蒸餾水1：10稀釋（1+9）。注意：如果出現(xiàn)結(jié)晶，將溶液置于室溫并攪拌直至結(jié)晶*溶解。

稀釋后的洗液在室溫放置24小時(shí)內(nèi)有效，2-8°C放置兩周內(nèi)有效。

顯色液：即用。顯色液對(duì)光敏感，應(yīng)避免光直射，避光保存。

終止液：即用。

8.檢測(cè)步驟

8.1檢測(cè)前注意事項(xiàng)

-檢測(cè)前將所有試劑室溫放置1小時(shí)；

-使用后立即將所有試劑放置于2-8°C；

-不得改變檢測(cè)程序；

-不得延長(zhǎng)或縮短孵育時(shí)間；

-孵育溫度不得高于25°C或低于18°C；

-孵育過程中不得晃動(dòng)酶標(biāo)板；

-使用精準(zhǔn)的移液器及吸頭；

-一旦開始實(shí)驗(yàn)，不要間斷地完成所有步驟，不要讓微孔干透；

-ELISA方法結(jié)果的再現(xiàn)性很大程度取決于洗板過程的效率和*性，要按照介紹的程序洗板；

-為避免交叉污染，加不同樣品和標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)要更換移液器吸頭；

-不得讓吸頭接觸到微孔內(nèi)的液體或者微孔內(nèi)表面；

-孵育時(shí)要避免光直射。建議孵育時(shí)用封板膜封板。

8.2檢測(cè)步驟

1.計(jì)算需要用到的微孔數(shù)量，標(biāo)記zui大光吸收值孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔的位置。注意要考慮到都要做重復(fù)。取出需要的板條，并將未使用的板條重新用鋁箔袋密封。準(zhǔn)備同等數(shù)量的預(yù)混合板條。

2.每個(gè)預(yù)混合孔加100μl酶偶聯(lián)物。

3.將標(biāo)準(zhǔn)品、樣本加50μl到對(duì)應(yīng)預(yù)混合孔。

4.用移液器將預(yù)混合孔內(nèi)溶液混勻（上下吹打3次），并立即吸取100μl到對(duì)應(yīng)包被嘔吐毒素抗體的微孔。注意：吸取不同微孔溶液時(shí)，要更換吸頭以避免交叉污染。

5.室溫孵育10分鐘。不得延長(zhǎng)孵育時(shí)間，孵育時(shí)不要晃動(dòng)微孔板。

6.洗板順序

-孵育后，倒掉孔內(nèi)液體；

-將微孔加滿工作濃度洗滌液，然后倒掉洗滌液；

-用力上下在吸水紙上拍板，將微孔內(nèi)液體*拍干。

重復(fù)洗滌過程3次。

在干凈的吸水紙上拍板，拍干微孔內(nèi)的液體。但不可使微孔干透。

7.顯色：用多道移液器加100μl顯色液到微孔，來回晃動(dòng)數(shù)秒鐘。

8.室溫避光孵育5分鐘。

9.用多道移液器加50μl終止液到各孔。來回晃動(dòng)數(shù)秒鐘充分混勻。

10.在15分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)讀數(shù)。

9. 計(jì)算結(jié)果

-計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的平均吸光值；

-用計(jì)算得到的平均吸光值分別除以0標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值并乘以100；

標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值（或樣品）

---------------------------- X100= (%)吸光度值

0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值 (Bo )

-以標(biāo)準(zhǔn)品濃度值（ng/ml）的半對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，B/B0值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

-將樣本的B/B0值帶入校準(zhǔn)曲線，得到相應(yīng)的濃度值(ppb)；

-由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度已經(jīng)考慮了樣本稀釋倍數(shù)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀到的濃度值即為樣本中玉米赤霉烯酮的濃度。

-如果應(yīng)用50-5000濃度范圍，則結(jié)果為從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀到的濃度值乘以稀釋倍數(shù)5.

10．樣品標(biāo)準(zhǔn)曲線示例

11.結(jié)果評(píng)價(jià)

計(jì)算出結(jié)果后，還需要驗(yàn)證檢測(cè)效果。通過將得到的結(jié)果和說明書提供的技術(shù)參數(shù)比較驗(yàn)證。如果結(jié)果與參數(shù)不符，請(qǐng)檢測(cè)試劑盒的有效期、讀取吸光值使用的波長(zhǎng)、以及操作過程是否正確。如果不是操作錯(cuò)誤，請(qǐng)的。

12.試劑盒參數(shù)

13．免責(zé)聲明

出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)，必須用確證方法對(duì)樣本檢測(cè)。TECNA公司不承擔(dān)任何因?yàn)槭褂谜咤e(cuò)誤使用試劑盒造成的損失。

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