嘔吐毒素（Deoxynivalenol）ELISA檢測試劑盒
（貨號：MD200）

特別提醒：本試劑盒有兩種標準液，MAIZE嘔吐毒素標準液用于測定玉米占比大的樣品，其他樣品采用嘔吐毒素標準液，如果同時檢測大量不同種類樣品（包括玉米），采用嘔吐毒素標準液。

本試劑盒用于定量檢測樣本中嘔吐毒素殘留。

檢測樣本：谷物、飼料

樣本前處理：

-谷物（玉米、小麥）和飼料：研磨、甲醇-水溶液提取、過濾、稀釋（可選）；

-硬質小麥：研磨、水提取、離心、稀釋

分析時間：20分鐘（不包括樣本前處理時間）

檢測限：

-玉米、小麥和飼料：0.04ppm

-硬質小麥：0.12ppm

特異性：交叉反應率（%）

1. 檢測原理

本試劑盒在預包被特異性嘔吐毒素抗體的微孔內進行。將酶標嘔吐毒素和標準品或樣本在預混合孔混合后轉移到包被嘔吐毒素抗體的微孔，*次孵育時，標準溶液或樣本中的嘔吐毒素和酶標嘔吐毒素競爭微孔上的嘔吐毒素抗體結合位點，洗板除掉所有未結合的酶標嘔吐毒素或自由嘔吐毒素分子。然后加入一定量顯色底物反應以檢測酶活性。加終止液終止反應，450nm波長酶標儀檢測，標準品或樣品中的嘔吐毒素濃度與吸收光強度成反比。

2.試劑盒組成
微孔板：96孔，預包被嘔吐毒素抗體。板條可拆開單獨使用。

預混合板：空白，未包被抗體。

MAIZE嘔吐毒素標準溶液：5瓶，各1.5ml，濃度分別為：0ppm，0.04 ppm，0.25ppm，1.25 ppm，5 ppm。

嘔吐毒素標準溶液：5瓶，各1.5ml，濃度分別為：0ppm，0.04 ppm，0.25ppm，1.25 ppm，5 ppm。

酶偶聯(lián)物：1瓶，14ml。

10X濃縮洗液：1瓶，50ml。

顯色液：1瓶，15ml。

終止液：1瓶，9ml。

3.需要使用但試劑盒不提供的試劑和設備
-天平
-甲醇（小麥、玉米、飼料）

-蒸餾水或去離子水

- NaCl（小麥、玉米、飼料）

-研磨器

-搖床（可選）

-離心機或濾紙

-恒溫箱

-氮吹儀

-20-200μl、100-1000μl移液器及吸頭
-20-300μl多道移液器及吸頭
-含450nm波長的酶標儀

4.注意事項
-僅用于體外檢測。
-一些試劑內含防腐劑；終止液內含有硫酸，具有腐蝕性；酶偶聯(lián)物對身體有害。
-小心操作，避免試劑接觸皮膚、眼睛和粘膜。

5.操作和存儲說明
-2-8°C冷藏保存，切勿冷凍。
-將未用完的板條用試劑盒提供的鋁箔袋重新密封。
-切勿使用過期產(chǎn)品。
-不同批次試劑盒內的成分不能混用。
-請使用試劑盒內提供的說明書。

6.樣本前處理步驟

6.1小麥、玉米和飼料

-將樣本混合均勻并充分研磨；

-稱取50g研磨樣本，并加入10g NaCl，再加入250ml 70%甲醇溶液。可選方案：稱取5g研磨樣本，并加入1g NaCl，再加入25ml 70%甲醇溶液。

-充分振蕩3分鐘。

-過濾樣本并收集濾液。用于檢測的樣本濃度范圍應為0.04-5ppm。

-如果樣本濃度>5ppm，用70%甲醇溶液將樣本稀釋5倍，使?jié)舛确秶鸀?.2-25ppm。

建議樣本的稱取量為50g，以得到更好結果。

6.2硬質小麥

-將樣本混合均勻并充分研磨；

-稱取50g研磨樣本，加入10g純氯化鈉，再加入250ml70%甲醇溶液；可選方案：稱取5g研磨樣本，加入1g氯化鈉后再加入25ml 70%甲醇溶液。

-充分搖晃15分鐘。注意：建議用手搖晃或溫和提取系統(tǒng)。也可以使用磁力攪拌器、振蕩器或攪拌機，但結果會偏高。

-過濾樣本并收集濾液。注意：過濾過程會很慢，建議過濾前讓樣本先沉淀。作為可選方法，建議在3500g離心力下離心5分鐘，收集上清液。

-用*甲醇將上清液稀釋3倍（1+2）（例如：100μl上清液+200μl *甲醇）。用于檢測的樣本濃度范圍應為0.12-15ppm。

-如果樣本濃度>5ppm，用70%甲醇溶液將樣本稀釋5倍，使?jié)舛确秶鸀?.6-75ppm。

建議樣本的稱取量為50g，以使得到更具代表性的樣本。

7．工作溶液準備

嘔吐毒素標準品：即用；

酶偶聯(lián)物：即用；

洗液：用蒸餾水1：10稀釋（1+9）。注意：如果出現(xiàn)結晶，將溶液置于室溫并攪拌直至結晶*溶解。

稀釋后的洗液在室溫放置24小時內有效，2-8°C放置兩周內有效。

顯色液：即用。顯色液對光敏感，應避免光直射，避光保存。

終止液：即用。

8.檢測步驟

8.1檢測前注意事項

-檢測前將所有試劑室溫放置1小時；

-使用后立即將所有試劑放置于2-8°C；

-不得改變檢測程序；

-不得延長或縮短孵育時間；

-孵育溫度不得高于25°C或低于18°C；

-孵育過程中不得晃動酶標板；

-使用精準的移液器及吸頭；

-一旦開始實驗，不要間斷地完成所有步驟，不要讓微孔干透；

-ELISA方法結果的再現(xiàn)性很大程度取決于洗板過程的效率和*性，要按照介紹的程序洗板；

-為避免交叉污染，加不同樣品和標準品時要更換移液器吸頭；

-不得讓吸頭接觸到微孔內的液體或者微孔內表面；

-孵育時要避免光直射。建議孵育時用封板膜封板。

8.2檢測步驟

1.計算需要用到的微孔數(shù)量，標記zui大光吸收值孔、標準品孔和樣本孔的位置。注意要考慮到都要做重復。取出需要的板條，并將未使用的板條重新用鋁箔袋密封。準備同等數(shù)量的預混合板條。

2.每個預混合孔加100μl酶偶聯(lián)物。

3.將標準品、樣本加50μl到對應預混合孔。標準品和樣本溶液含高濃度甲醇，因此加入微孔前用移液器將溶液反復吹打幾次。

4.用移液器將預混合孔內溶液混勻（上下吹打3次），并立即吸取100μl到對應包被嘔吐毒素抗體的微孔。注意：吸取不同微孔溶液時，要更換吸頭以避免交叉污染。

5.室溫孵育10分鐘。不得延長孵育時間，孵育時不要晃動微孔板。

6.洗板順序

-孵育后，倒掉孔內液體；

-將微孔加滿工作濃度洗滌液，然后倒掉洗滌液；

-用力上下在吸水紙上拍板，將微孔內液體*拍干。

重復洗滌過程3次。

在干凈的吸水紙上拍板，拍干微孔內的液體。但不可使微孔干透。

7.顯色：用多道移液器加100μl顯色液到微孔，來回晃動數(shù)秒鐘。

8.室溫避光孵育10分鐘。

9.用多道移液器加50μl終止液到各孔。來回晃動數(shù)秒鐘充分混勻。

10.在1小時內，用酶標儀450nm波長讀數(shù)。

9. 計算結果

-計算標準品和樣品的平均吸光值；

-用計算得到的平均吸光值分別除以0標準品的吸光值并乘以100；

標準品的吸光度值（或樣品）

---------------------------- X100= (%)吸光度值

0標準的吸光度值 (Bo )

-以標準品濃度值（ng/ml）的半對數(shù)值為橫坐標，B/B0值為縱坐標繪制標準曲線；

-將樣本的B/B0值帶入校準曲線，得到相應的濃度值；

-要得到樣本中嘔吐毒素的濃度值，還需要將從校準曲線讀到的濃度乘以相應樣本的稀釋倍數(shù)。

-小麥、玉米和飼料：由于標準品濃度已經(jīng)考慮了樣本稀釋倍數(shù)，從標準曲線讀到的濃度值即為樣本中嘔吐毒素的濃度。

-硬質小麥：稀釋倍數(shù)為3。

-所有樣本：如果提取過程中進一步稀釋5倍以得到更大濃度范圍，則結果需要再乘以稀釋倍數(shù)5.

10．樣品標準曲線示例

11.結果評價

計算出結果后，還需要驗證檢測效果。通過將得到的結果和說明書提供的技術參數(shù)比較驗證。如果結果與參數(shù)不符，請檢測試劑盒的有效期、讀取吸光值使用的波長、以及操作過程是否正確。如果不是操作錯誤，請的。

12.試劑盒參數(shù)

13．免責聲明

出現(xiàn)陽性結果時，必須用確證方法對樣本檢測。TECNA公司不承擔任何因為使用者錯誤使用試劑盒造成的損失。

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