考馬斯亮藍法測蛋白含量測定

貨號：YW2
規格：50T/48

產品簡介 ：
    樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。
    在酸性溶液中，考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合形成藍色復合物；該復合物在 595nm 處有大吸收峰，其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質分析。

    聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺(簡稱TEMED)和催化劑過硫酸銨(簡稱AP)或核黃素(即vitamin B2)的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳
(polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱PAGE)

    SDS－PAGE是在要電泳的樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇(或者DTT)的樣品處理液，SDS可以斷開分子內和分子間的氫鍵，破壞蛋白質分子的二級和三級結構，β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質的四級結構。SDS還與蛋白質結合使蛋白質－SDS復合物上帶有大量的負電荷，這時各種蛋白質分子本身的電荷*被SDS掩蓋。這樣電泳時，就消除了各種蛋白質本身電荷及結構上的差異，電泳速度只是與蛋白質分子量有關。用本法測定蛋白質的分子量只需根據待測蛋白質在已知分子量的標準蛋白質圖中的位置，就能得知分子量。

試驗中所需的儀器和試劑：
     酶標儀、酶標板、移液器和蒸餾水。

產品內容 ：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
標準品：液體×1 瓶，4℃保存。

操作步驟 ：
一 、 樣品中可溶性蛋白質提取 ：
    液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。
    組織樣品：準確稱取約 0.1 g 樣品，加 1mL 提取液（ 自備，根據需要可以是酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水） ，冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。 （動物樣品常常需要稀釋）
二 、 吸光值測定 ：
    1. 分光光度計儀預熱 30 min 以上，調節波長到 595nm，蒸餾水調零。
    2.  空白 管： 取 1mL 玻璃比色皿， 加入 200µL  蒸餾水， 1000µL 試劑一， 混勻后室溫靜置 10min， 于 595nm測定吸光度，10~20min 內完成測定，記為 A 空白管。
    3.  標準 管： 取 1mL 玻璃比色皿， 加入 200µL  標準液， 1000µL 試劑一， 混勻后室溫靜置 10min， 于 595nm測定吸光度，10~20min 內完成測定，記為 A 標準管。
    4.  測定 管：取 1mL 玻璃比色皿板，加入 200µL  待測液，1000µL 試劑一，混勻后室溫靜置 10min，于595nm 測定吸光度，10~20min 內完成測定，記為 A 測定管。
蛋白質含量 計 算 ：
   C 待測（µg/m L）= C 標準管×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)=50×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)
   C 標準管：標準品蛋白質濃度，50µg/mL。

注意事項 ：
    1．加考馬斯亮藍后，在 10~20min 內吸光值相對較穩定，因此須在 10~20min 完成比色。
    2．不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，測完成后立即用 95%乙醇沖洗。
    3．測定前用 1~2 個樣做預實驗，確保蛋白濃度在 0~100µg/ml 范圍內，否則需要做相應稀釋。

考馬斯亮藍法測蛋白含量測定訂購說明：

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運輸說明：

1、極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
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