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PicaGreen(效果同PicoGreen)dsDNA 定量檢測試劑盒

具體成交價以合同協議為準
  • 公司名稱 北京索萊寶科技有限公司
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號
  • 產地 北京通州
  • 廠商性質 生產廠家
  • 更新時間 2018/11/1 0:00:00
  • 訪問次數 3129

聯系我們時請說明是化工儀器網上看到的信息,謝謝!


北京索萊寶科技有限公司是一家從事生物學試劑及試劑盒的高科技生物企業。

總部位于北京,并在全國設有經銷或代理機構。產品因可靠而穩定的質量和較為完善的售后服務確立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客戶為中心、以產品為保障、以誠信為基礎、以創新為宗旨”的發展理念,擁有專業的研發和質量檢測團隊以及*的倉儲和物流系統。“Solarbio”已經得到全國科研工作者的認可,成為廣大經銷商推崇的。

公司擁有一批專業的研發人員,我們專注于生物產品的不斷完善和創新。產品覆蓋面廣,品質可靠。先后開發了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、生物醫學等領域的多種試劑及試劑盒。同時,索萊寶公司提供各種常規生化試劑,庫存常備產品多達10000多種,可隨時為廣大科研工作者提供各類專業試劑。在質量方面,索萊寶謹記公司信念:質量高于一切。所有研發的產品都設有嚴謹的生產流程,科學的質量檢測方法和成熟的質量檢測程序,我們恪守對每一位用戶的承諾:用專業的態度做專業的品牌。同時,公司組建了一支專業的技術服務隊伍,能夠為科研工作者提供專業的技術服務。每一位購買索萊寶產品的用戶都能夠得到專業的咨詢和完善的售后服務。

索萊寶公司堅持與接軌,注重和*企業的合作與交流,并提供產品代理、市場咨詢等多項服務。公司將一如既往與世界更多合作,不斷為廣大生物科研工作者提供更優質的產品和服務。公司理念:“為科研服務,為生命盡責”。一個人能夠走多遠,取決于與誰同行。索萊寶公司期待與各同行精誠合作。

索萊寶誠招生物試劑研發人員,期待與廣大同行精誠合作,為廣大科研工作者提供優質的產品,高效的物流以及專業的售后服務。索萊寶感謝所有朋友的支持與幫助,您的支持是我們前進的動力和保障。讓我們攜手同行,共同創造美好的明天。

2016年索萊寶獲得*認證。

生化試劑,分子生物學試劑,免疫學試劑,細胞培養試劑及耗材

 

                    

PicaGreen(效果同PicoGreendsDNA 定量檢測試劑盒 *2000*

試劑組成:

 

產品名稱:PicaGreen(效果同PicoGreendsDNA 定量檢測試劑盒 *2000*

種類:試劑盒

供應商:北京索萊寶

試劑

體積

 

保存條件

保存期

Component A

PicoGreen 試劑

 

1ml 200× in DMSO

 

Solution in DMSO

4 ºC 避光

 

 

 

半年

Component B

TE

 

 

50mL

 

 

室溫保存

Component c1ml 小牛胸腺DNA

 

1 mL

 

1ug/ml in TE Buffer

 

4 ºC 保存

PicaGreen(效果同PicoGreendsDNA 定量檢測試劑盒 *2000*

操作步驟:

 

1、試劑制備

PicaGreen dsDNA Component A (定量試劑是以1mL 的濃縮液形式保存在無水的DMSO(二甲基亞砜)中。實驗當天,配制2XPicoGreen 試劑的操作溶液,用1xTEComponent B1:200 的比例稀釋濃縮液。如果要準備足夠的操作溶液測定20 個樣品,可在20mL1x TE Component B中加入100μLPicaGreen dsDNAComponent A 定量試劑。由于試劑容易吸附到玻璃表面,要在塑料容器中配制。PicaGreen 試劑(Component A )見光易降解,所以應將配好的溶液用箔包住或放置暗處避光保存。溶液在配制好數小時內使用,以保證*結果。

 

2 DNA 標準曲線

 

2.1 預備1μg/mLdsDNA Component c 貯存液于1x TE 中。根據在1cm 光程長度的比色杯中A260nm 時的吸光度確定DNA 濃度;相應于1μg/mLdsDNA 溶液A260=0.02。盡管任何純化的dsDNA 制劑都可用來做標準曲線,但常用的是小牛胸腺DNA。用跟被檢測的樣品相似的DNA 做標準曲線,用或長或短的線型DNA 片段測定相近大小的酶切片段;質粒用于測定質粒DNA。然而大部分線狀dsDNA 分子,不管其片段長度大小,都會產生大致相等的信號。PicaGreen 試劑測定法在通常污染核酸制劑的幾種復合物存在的條件下仍能保持線狀,盡管信號強度可能受到影響。因此,為了得到有效的對照處理,被用

來做標準曲線的dsDNA 溶液要用和實驗樣品相同的方式來處理,并且應該包含相同的可能存在的污染物。

 

2.2 要產生從0.5ng/mL 500ng/mL(見表1)單重復8 個點的標準曲線,在2X 終濃度下配制一系列的DNA 溶液,混合相同體積的2XDNA 2XPicaGreen 操作溶液,放入10×10mm 比色杯中。混合相同體積的1XTE 2XPicaGreen 操作溶液以備空白對照。避光于室溫下放置2-5 分鐘。

 

 

2XDNA 溶液濃度

ng/mL

2XDNA 溶液的體積

mL

2XPicaGreen 溶液的

體積(mL

PicaGreen 試劑測定中DNA 的終濃度(ng/mL)

1000

1

1

500

200

1

1

100

50

1

1

25

20

1

1

10

5

1

1

2.5

2

1

1

1

1

1

1

0.5

0

1

1

空白

 

1 10×10mm 比色杯時DNA 標準曲線

 

2.3 當用微量檢測皿適配器時,PicaGreen 測定也可在較低的測定體積(50μL 200μL)內完成。欲產生從1ng/mL 100ng/mL(見表2)的標準曲線,在2X 終濃度下配制一系列的DNA 溶液,混合相同體積的2XDNA 2XPicaGreen 操作溶液,將至少50μL 溶液轉移到微量檢測皿中。確信不要在樣品中引入氣泡,輕輕地彈微量檢測皿的外部經常可以驅散氣泡。避光于室溫下放置2-5 分鐘。

 

2X DNA 溶液濃度

ng/mL

2X DNA 溶液的體積

uL

2X PicaGreen 溶液的體積(uL

PicaGreen 試劑測定中DNA 的終濃度(ng/mL)

200

30

30

100

50

30

30

25

20

30

30

10

5

30

30

2.5

2

30

30

1

0

30

30

空白

 

2 用微量檢測皿時DNA 標準曲線

 

2.4孵育后用合適的熒光計測量樣品熒光值。選擇藍色激發光,用熒光值zui大的樣品校正儀

器。

 

2.5 測量剩余樣品的熒光值。不同的微型熒光計將給出一個直接的濃度讀數,數據可以用來產生DNA 濃度的標準曲線,下面以TBS-380 微型熒光計為例。

 

 

 

 

 

 

             1     PicaGreen 標準曲線

3、樣品分析

3.1 1X TE 稀釋未知DNA 樣品至需要的體積(10×10mm 比色杯需1.0mL,微量檢測皿需25-100μL)。對樣品高度稀釋可以確保任何污染物都被zui大限度地沖淡。然而,也要避免取樣體積太小而無法精確吸取的情況。去除樣品中RNA ssDNA 參照4 部分。

3.2 在每個樣品中加入2XPicaGreen 試劑的操作溶液(3.1 節準備),混合好,將混合物移入合適的比色杯,避光于室溫下放置2-5 分鐘。

3.3 可以對樣品進行不同的稀釋處理重復測定以確保結果的準確性。

 

4 去除樣品中單鏈核苷酸

 

ssDNA dsDNA 等摩爾濃度時,后者的測定受前者的干擾很小。前者濃度10 倍于后者時,。對熒光信號的干擾也不過10%。但當DNA 濃度低時,ssDNA 能產生較大干擾在高濃度時,由RNA 結合PicaGreen 試劑產生的熒光值用RNA酶處理樣品可消除。RNA A、酶T1 結合核酸酶S1 能除去所有單鏈核酸,從而保證樣品熒光值是由dsDNA 產生。(具體做法請查閱相關的參考文獻)

 

 

參考文獻:

[1] Nucleic Acids Res. 24, 2623 (1996)

[2] BioTechniques 21, 372 (1996)

[3] BioTechniques 21, 664 (1996)

[4] Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 6091 (1996)

[5] Anal. Biochem. 102, 344 (1980)

[6] Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, J. Sambrook, E.F. Fritsch and

T. Maniatis, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (1989)



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