產(chǎn)品名稱:BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)

貨號(hào) :SX-C0079

培養(yǎng)基 :"*培養(yǎng)基有售,用我們拜力生物的*培養(yǎng)基，細(xì)胞培養(yǎng)更省心！"

規(guī)格 :5×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

供應(yīng)商 :拜力生物

貨期 :7-10天

BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：

建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。

洗板方法

1.  手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

2.  自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo))，OD值為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo))，在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析，如curve expert 1.3，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

◇      注意事項(xiàng)：

收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí)，-20℃可保存1個(gè)月。-70度可保存6個(gè)月。部分標(biāo)本需添加抑tai酶。

◇      液體類標(biāo)本

標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測(cè)種類。

◇      血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

◇      血漿：

應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

◇      尿液、胸腹水、腦脊液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

◇      細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

◇      組織標(biāo)本：

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清置于-20度或- 70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。