前沿簡介：

     腫瘤壞死因子-α是一類主要由巨噬細胞分泌的多功能細胞因子，在炎癥反應、細胞凋亡及免疫系統發育過程中起著關鍵作用。TNF-α主要由巨噬細胞分泌，但其他類型的細胞如CD4+淋巴細胞，NK細胞、神經元細胞也能夠分泌。

靈敏度：6.3pg/mL   檢測范圍：125-8000 pg/ml 

分析時間：4h

樣品類型：血漿、血清、細胞培養上清液

樣品用途：此試劑盒只用于牛腫瘤壞死因子-α的檢測

試劑盒保存溫度：2-8℃

規格：96T

實驗原理：

本試劑盒采用雙抗體夾心法測定標本中牛腫瘤壞死因子-α的水平。用純化的牛腫瘤壞死因子-α抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入牛腫瘤壞死因子-α，再與牛腫瘤壞死因子-α抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛腫瘤壞死因子-α呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中牛腫瘤壞死因子-α濃度。

Elisa試劑盒實驗注意事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

2.  加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間（包括標準品及所有樣品）控制在10分鐘內，如標本數量多，*使用多道移液器加樣。

3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。

4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標儀讀數。

5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請精確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置（如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl），以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。

6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。

     7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數。